Determinación de azúcares reductores

Biología
1º CyTA

DETERMINACIÓN DE
AZÚCARES REDUCTORES
MÉTODO DE SOMOGYNELSON

Briongos Sánchez, Heliodoro

1. Objetivo de la práctica.
Con esta práctica queremos averiguar la cantidad de azucares reductores
presentes en tres disoluciones problema de glucosa, de concentración
desconocida. Para ello, llevaremos a cabo el método colorimétrico de SomogyiNelson (Nelson, 1944; Somogyi,1952).

2. Fundamentos.
Los azucares reductores son aquellos que tienen en su estructura, el grupo
funcional (carbonilo) libre, y a través del mismo pueden reaccionar con otros
compuestos. Este carácter reductor se pone de manifiesto en las reacciones de
oxidación, donde el carbono carbonílico se oxida a ác.carboxílico por acción de
productos con soluciones alcalinas y de iones metálicosreducibles, como por
ejemplo Cu+2 o Ag+.
Con el método de Somogyi-Nelson podemos determinar la cantidad de azucares
reductores en una disolución, capaces de reducir Cu+2 hasta Cu+ en un medio
alcalino. Formando un complejo estable de color azul, que podemos medir
espectrofotométricamente.

3. Materiales.
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12 tubos de ensayo de tapa roscada
Soporte para lostubos de ensayo
Rotulador
Vaso de precipitados de 50 o 100 ml
Micropipetas con sus correspondientes puntas
Frasco lavador con agua destilada
Agitador tubos ensayo
Estufa de baño de temperatura constante
Espectrofotómetro y cubetas
Soluciones de glucosa de concentración desconocida (Sol. A – C – D)
Solución de glucosa de concentración conocida (500ppm)

1

 Reactivos:
o Somogyi I:disolver en agua destilada, y por separado, 72 g
deNa2SO4, 6 g de tartrato sódico-potásico, 12 g de Na2CO3 y 8 g de
Na2HCO3. Mezclarlos y diluir hasta un volumen final de 400 ml.
o Somogyi II: disolver en agua destilada, y por separado, 18 g de
Na2SO4 y 2 g de CuSO4 . 5H2O. Mezclarlos y diluir hasta un volumen
final de 100 ml.
o Nelson: disolver 12,5 g de (NH4)6Mo7O24 . 4H2O en 225 ml de aguadestilada. Verter lentamente 10,5 ml de H2SO4 concentrado y
añadir 1,5 g de Na2HAsO4 . 7H2O disueltos en 12,5 ml de agua
destilada. Incubar a 37°C durante 24-48 h en una botella de cristal
ámbar. Almacenar a temperatura ambiente.

4. Procedimiento de la práctica.
Para determinar la cantidad de azucares reductores en la disoluciones de
glucosa con concentración desconocida, deberemospreparar una curva de
calibrado que utilizaremos de patrón a la hora de medir en el
espectrofotómetro. Para preparar las disoluciones problema y la curva de
calibrado procederemos de la siguiente manera.
En primer lugar marcaremos los tubos de ensayo con el rotulador para tenerlos
bien identificados.
Antes de empezar a llenar los tubos de ensayo con las disoluciones problema,
mezclaremos losreactivos Somogyi I y Somogyi II en una proporción 4 – 1 (v/v),
para ello, calcularemos cuanta cantidad de esta disolución vamos a necesitar, al
tener doce tubos de ensayo en los que habrá que echar 2 ml de esta disolución,
prepararemos 30 ml. Mediremos con la micropipeta 24 ml (en varias medidas)
del reactivo Somogyi I y lo echaremos en el vaso de precipitados, luego 6 ml del
reactivo Somogyi IIy lo mezclaremos con el anterior.
Despues mezclaremos por duplicado 2ml de la muestra problema con 2 ml de
reactivo Smogyi (I y II), taparemos los tubos y los agitaremos.
Ahora prepararemos la curva de calibrado, que nos servirá de patrón a la hora
de medir. Para ello, utilizaremos la solución de glucosa de 500 ppm, y a partir de
ella prepararemos las siguientes diluciones:

2

Sol.Glucosa 500ppm
(ml)
0,0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5

H20 (ml)
2,0
1,9
1,8
1,7
1,6
1,5

[ ] Glucosa (ppm)
0
5
10
15
20
25

Una vez tengamos preparadas estas diluciones, les añadiremos 2 ml de reactivo
Somogyi (I y II) y las agitaremos.
Llevaremos a incubar todos los tubos en un baño de agua hirviendo durante
unos 15 min. Pasado ese tiempo, se enfriaran y añadiremos a cada tubo 2...