difusion gel
UNIVERSIDAD INTERAMERICANA
RECINTO DE ARECIBO
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS Y TECNOLOGÍA
Laboratorio de Inmunología
Biología 3405
I. Título:
Difusión en Gel (Precipitación)II. Objetivo:
Familiarizar al estudiante con la técnica de precipitación de antígenos-anticuerpos en gel.
III. Introducción:
La técnica de difusión en gel combina los procesos de difusión einmunoprecipitación. Esta técnica nos sirve para determinar la pureza, homogeneidad y pares complementarios de antígenos y anticuerpos presentes en una muestra.
La precipitación es el resultadode una reacción de antígenos solubles en la muestra con anticuerpos homólogos solubles, que reaccionan in vitro.
Las reacciones primarias entre Ag y Ab son los enlaces entre ambos, que a su vezresultan en las reacciones secundarias (precipitación cuando el Ag y el Ab son solubles y aglutinación cuando el antígeno está adherido a partículas).
El sitio activo del Ab tiene una estructuratridimensional que acepta la forma del Ag. La reacción es sumamente específica, similar a los receptores de virus o a las reacciones enzimáticas. En esta reacción no se forman enlaces covalentes, sinoque la afinidad depende de:
1 Enlaces de Hidrógeno
2 Fuerzas electrostáticas
3 Fuerzas de Van Der Waals
4 Enlaces hidrofóbicos.
Estas fuerzas de atracción son relativamente débiles, pero enconjunto son bastante poderosas. Los enlaces son reversibles (o sea que se forman y se deshacen) y también se afectan por el pH del medio y la concentración de sales. Para que estos enlaces ocurran tieneque haber superficies complementarias en el Ag y el Ab y cargas complementarias.
La difusión se lleva a cabo en un medio semisólido hasta que se logra el punto óptimo de concentración. Alalcanzar este punto ocurre la precipitación en forma de una banda perpendicular a los pozos donde se colocaron los reactivos.
Una de las técnicas de precipitación más comunes es la de difusión doble...
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