encimas

Un enzima de restricción (o endonucleasas de restricción) es aquella que puede reconocer una secuencia característica de nucleótidos dentro de una molécula de ADN y cortar el ADN en ese punto en concreto, llamado sitio o diana de restricción, o en un sitio no muy lejano a éste. Los sitios de restricción cuentan con entre 4 y 12 pares de bases, con las que son reconocidos.
El mecanismo de cortede DNA se realiza a través de la ruptura de dos enlaces fosfodiéster en la doble hebra, lo que da lugar a dos extremos de DNA. Éstos pueden ser romos (cuando los enlaces rotos coinciden) o Cohesivos/escalonados. Estos últimos tienen tendencia a volver a unirse de modo espontáneo, ya que los extremos se pueden unir a otros extremos coincidentes que pueda haber en la cercanía
Las enzimas derestricción que a pesar de ser distintas y provenir de distintas especies, tienen la misma secuencia de reconocimiento y dejan el mismo extremo cohesivo, pero no cortan en el mismo sitio
La enzima de restricción va recorriendo la cadena de ADN y va buscando el sito de reconocimiento de la enzima; Va buscando una secuencia especifica cttag cuando encuentre los seis nucleótidos específicos como los yamencionado va a cortar en el puente especifico así que corta en la parte de arriba como de abajo en diversos pedazos fragmentando la cadena de ad. ; A enzimas tienen una nomenclatura.
nomenclatura recibe cuatro reglas.
1º. Tres letras que corresponden al nombre científico del microorganismo, y por ello las tres primeras letras del nombre se escriben en cursiva.
2º. La cepa o estirpe si lahubiese (ej. EcoR, aislada de la cepa "RY13" de E. coli )
3º. En números romanos, un número para distinguir si hay más de una endonucleasa aislada de esa misma especie. No confundir con el tipo de enzima de restricción.
4º. Todas deberían llevar adelante una R de restricción o un M de metilasa según la función de la enzima, pero generalmente se omite. (cuadro. 1.)
Nomenclatura
Ejemplo
Correspondea:
E
Escherichia
Género de la bacteria
co
coli
Especie de la bacteria
R
RY13
Cepa de la bacteria
I
La primera enzima identificada
Orden de identificación de la enzima en la bacteria




Existen, en general, 3 sistemas de enzimas de restricción:
Tipo 1: Una sola enzima (con 3 subunidades) tiene actividad de restricción (corta) y modificación (metila). Al reconocer la secuenciaespecífica de DNA corta al azar en sitios distintos al sitio de reconocimiento, ya sea corriente arriba o corriente abajo. El corte deja extremos cohesivos. Necesitan de ATP para moverse en el DNA, desde el lugar de reconocimiento hasta el sitio de corte (unas 1000 pares de bases aproximadamente), además de SAM (S-adenosil-metionina) y Mg++ como cofactores.
Tipo 2: Solo tienen actividad derestricción. Otras enzimas llevan a cabo la metilación. El corte es efectuado en el sitio de reconocimiento, o bien, cerca de él, por lo que el corte es resistente y predecible. Por esta característica es que son muy utilizadas para clonación de genes, ya que al cortar en sitios específicos se pueden recuperar secuencias conocidas. Sólo requieren Mg++ como cofactor, no necesitan de ATP...
Tipo 3: Seutiliza una enzima oligomérica que realiza todas las actividades enzimáticas. Tienen función de restricción y modificación. Cortan de 25 a 27 pares de bases lejos del sitio de reconocimiento, dejando extremos cohesivos. Requieren dos secuencias de reconocimiento en orientación opuesta en la misma cadena de DNA. Necesitan ATP, Mg++ y SAM (S-adenosil-metionina) como cofactores.
En la enzimas existendiferencias fenotípicas, cuando hay cepas distinguibles se les dan nombres específicos y al final se le anexa un numero romano solo para diferenciar que si de esa misma cepa parten mas, no cometer errores.
Los cortes no romos, son aquellos que son cortados sin su pareja y por ende el fragmento queda en escalerita. Si se encuentra otro fragmento que la misma base corto.
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