Ensayo sobre ingeniería genética

Articulo 3
La superexpresión en Arabidopsis Thaliana de un gen de Trichoderma Harzaianum que modula la actividad glucosidasa y aumenta la tolerancia a estrés osmótico y salino.

Conclusión

Dado que el gen Trichoderma Thkel1 no mostró identidad de nucleótidos
con genes depositados en bases de datos públicas y se muestra sólo una
bajo nivel de homología con las proteínas de hongoshipotética y plantas
nitrilo ESP, que contienen dominios Kelch, el papel biológico de esta
gen del hongo no es fácil de determinar. Hemos analizado la expresión
de este gen en T. harzianum T34 en una gran variedad de condiciones de crecimiento
(Datos no mostrados), y los mayores niveles de transcripción se
detectado en 4 ◦ C y con 10% de NaCl. Thkel1 expresión de los genes no se
aumento de laglucosa en la inanición, pero fue reprimido en presencia
de la glucosa. El análisis funcional de Thkel1 se llevó a cabo por
un enfoque en el silenciamiento de T. harzianum T34 y como era de esperar
Thkel1 transformantes mostraron menores QRT-PCR los niveles de transcripción de
la cepa de tipo salvaje, que se cultiva en condiciones de máxima gen
expresión: 4 ◦ C durante 4 horas (Fig. 4).Aunque ausentes en procariotas, las proteínas son muy abundantes en Kelch
eucariotas. Se cree que participan en la formación de
complejos de proteínas, pero su papel no está del todo bien entendido
(Adams et al, 2000;.. Schumann et al, 2010). Las proteínas de hongos con
dominios Kelch se han relacionado con G proteínas mediada por las vías
en Saccharomyces cerevisiae (Niranjan et al.,2007) o la galactosa oxidasa
la actividad de las especies de fitopatógenos Botrytis, Gibberella,
Magnaporthe y Stagonospora (Soanes et al., 2008). ThKEL1 hizo
no muestran esa identidad de aminoácidos, pero compartida con homología
ESP Arabidopsis implicados en el complejo regulador de glucosinolatos /
mirosinasa sistema de defensa (Morant et al., 2008). Por otra parte,
uno de los 6 PEidentificados en Arabidopsis ha sido considerado como
el antepasado de las proteínas con motivos Kelch (Burow et al., 2009), también
presentes en las proteínas hipotéticas de Aspergillus y Gibberella,
y muestra el mayor identidad con ThKEL1. Algunos ESP se supone
a participar en la formación de complejos de proteínas con
?-Glucosidasas, jugando un papel importante en la defensa de laplanta y Abel, 2006; Yan y Chen, 2007). Por ejemplo, la glucosidasa
PYK10 y su socio PBP1 (PYK10 unión a proteínas), una molecular
acompañante que permite el correcto plegamiento de PYK10 cuando Arabidopsis
estructuras subcelulares están dañados (Nagano et al., 2005, 2008).
Otro ejemplo de interacción entre un?-Glucosidasa, Glu1,
y su socio?-glucosidasa factor de agregación (BGAF), ha sidoinformó en el maíz (Blanchard et al., 2001). Sin embargo, la biológica
papel de estos complejos no se entiende bien, aunque se ha
ha sugerido que la formación de estos agregados entre un
?-Glucosidasa y la interacción de proteínas puede ser la manera de proteger
la molécula enzimática (Nagano et al., 2005).
¿Cuándo?-Glucosidasa se midió la actividad de Trichoderma
cepas, los tres transformantessilenciados mostraron niveles más bajos de
los detectados en la cepa T34 después de incubación a 28 ◦ C durante 24 h. Este
resultado de ello, también se observó para los transformantes silenciados Kel4 y Kel10
a 4 ◦ C, se relaciona ThKEL1 a la modulación de la actividad?-glucosidasa
en Trichoderma. Teniendo en cuenta que la mayor Thkel1
nivel de transcripción en la cepa de tipo salvaje seobservó en 4-H de edad
culturas y la glucosa que reprime este gen (Fig. 2), podría ser
espera que este aumento de la transcripción a tiempo puede conducir a una mejora
glucosidasa. Como se muestra en nuestros experimentos, la glucosa puede
también actúan como un represor catabólico de Thkel1. Crecimiento importante colonia
se observaron diferencias entre los transformantes de tipo salvaje y...