Falsos Positivos De Pcr

cr FRALSOS PÓSITIVOS PARA LA PCR
Falsos positivos debidos a la muestra Una situación que puede dar lugar a un resultado
falso positivo es la presencia en la muestra de ADNlibre o de células muertas o irreversiblemente dañadas, ya que la PCR no es capaz de distinguirlo de las células vivas. Los análisis de patógenos en alimentos incluyen habitualmenteunpaso inicial de enriquecimiento en un caldo de cultivo, en el que las bacterias sólo crecerán si éstas están vivas y además activas.El crecimiento exponencial de estas bacterias ylos límites de detección de los métodos basados en PCR hacen que los resultados falsos positivos
debidos a células muertas en la muestra sean mínimos y se den únicamente enaquellos
casos en que el contenido de ADN libre o de células muertas en la muestra sea muy elevado.Para prevenir estos falsos positivos debidos a la muestra, la PCR a tiempo real ofreceuna solución sencilla y elegante, basada en su carácter cuantitativo. A igual volumen de medio de enriquecimiento aquella muestra con un mayor número de bacterias será positivacon un valor menor de Ct. Así pues, cuando sospechamos de la presencia de una carga considerable de ADN libre o de bacterias muertas o inactivas en una
muestra alimentaria, elprocedimiento adecuado
sería el siguiente:
1. Toma de muestra del medio de preenriquecimiento
(APT, Fraser, Bolton) justo tras el
momento de su inoculación
2. Incubación durante eltiempo establecido
por la norma
3. Toma de muestra
4. Extracción de ADN y análisis de las muestras
pre- y post-incubación.
5. Comparación de los valores de Ct
Si el valor deCt post incubación es inferior al
inicial podemos afirmar que las bacterias estaban
activas pues el número ha aumentado durante
el proceso de preenriquiecimiento (Fig. 1)