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UNIVERSIDAD CIENTÍFICA DEL SUR.

FACULTAD: MEDICINA HUMANA.


CURSO: Biología Celular y Molecular.

TEMA:
PCR, uso de encimas de restricción y fosfo.


INTEGRANTES:
Angulo Nalvarte Jackeline
Burbano Leon Natalia
Villar Galvez Bryan

HORARIO: lunes 3:00 – 5:00 pm.
DOCENTES: Gisella Katia Guillen Aguirre.
Joyse Dione Del Pino Robles.

2013 – IINTRODUCCIÓN:
Por medio del siguiente informe detallaremos los procedimientos y los respectivos resultados los laboratorios de microscopia realizados los días 17 y 24 de junio del 2013. A continuación explicaremos paso por paso cada uno de los puntos que nos permitieron llegar a las conclusiones finales y al hallazgo de un nuevo conocimiento, un salto de la teoría a la práctica empleando el métodocientífico.

MARCO TEÓRICO:
PCR.
La reacción en cadena de la polimerasa, cuyas siglas en ingles son PCR (PolymeraseChainReaction) es una técnica muy usada en el campo de la biología molecular, la cual fue desarrollada por KaryMullis en 1986, lo cual lo hizo acreedor en 1993 del Premio Nobel en Química. El objetivo de esta técnica es obtener un gran número de copias de un fragmento de ADNparticular mediante una amplificación in vitro., es una técnica de amplificación selectiva, la cual se basa en la capacidad de la enzima ADN polimerasa en fabricar una cadena de ADN complementaria a una ya existente.
Para realizar la técnica de PCR se necesita de:
• Desoxinucleotidostrifosfato (dNTPs), mezcla de los cuatro Desoxinucleotidos que son el sustrato para la síntesis del nuevo ADN.
•Cebadores (primers),oligonucleótidos complementarios a una de las hebras del ADN, delimitando la zona de ADN que se quiere amplificar.
• ADN polimerasa, enzima termoestable (Taq polimerasa) que se encarga de la síntesis de la cadena de ADN.
• ADN molde, molécula que contiene la región de ADN que se va a amplificar.
• Solución tampón o buffer, solución que permite el adecuado funcionamiento de laADN polimerasa.
• Iones divalentes.

Cada ciclo de PCR consiste en tres etapas: la primera, donde el ADN molde es incubado a altas temperaturas para desnaturalizarlo y de esta manera permitir el fácil acceso de los cebadores al ADN molde; la segunda o etapa de alineamiento, donde los cebadores hibridan con sus secuencias complementarias del ADN molde y por último, la etapa de elongación en lacual la ADN polimerasa sintetiza de los fragmentos de ADN a partir de los cebadores que ya se han alienado. La detección del producto de una PCR se realiza normalmente mediante una corrida electroforética.
PROCESO DEL PCR:

Dentro de las aplicaciones de esta técnica se pueden mencionar los análisis forenses, identificación de sospechosos con pequeñas muestras de sangre, semen o pelo,identificación de padres en litigios de paternidad, microbiología ambiental, en el diagnóstico de enfermedades infecciosas, en el diagnóstico prenatal de enfermedades genéticas, diagnóstico de cáncer, en técnicas de clonaje y secuenciación de ADN genómico.
ENCIMAS DE RESTRICCIÓN.
Las enzimas de restricción, también conocidas como endonucleasas, son enzimas que cortan los enlaces fosfodiester del materialgenético a partir de una secuencia que reconocen. Las mismas permiten cortar DNA de hebra doble, donde reconocen secuencias palindrómicas (secuencias que se leen igual en ambas direcciones).
 
 Son extraídas de organismos procarióticos (bacterias), donde actúan como un mecanismo de defensa, para degradar material genético extraño que entre en la célula.  Las bacterias tienen la capacidad demetilar su DNA, lo cual sirve para distinguir entre el DNA extraño y el DNA propio.  Las enzimas de restricción no pueden cortar DNA metilado, de este modo solo afectan el DNA extranjero y no el DNA bacterial.
 
·        Existen 3 tipos de enzimas de restricción:
 
1.      Tipo I y Tipo III:

a.  Tienen actividad de restricción (cortan) y modificación (metilan).
b.      Cortan a cierta...