Identificación de proteínas

Páginas: 5 (1050 palabras) Publicado: 19 de marzo de 2013

PRÁCTICA I
Reconocimiento y cuantificación de proteínas.


20/02/2013
Luna Jiménez Castilla
Bioquímica. 1º Biotecnología. Grupo 1. UPO.


Esta primera práctica del semestre, trata sobre el reconocimiento y cuantificación de proteínas. Los objetivos son:
1. Conocer los diferentes métodos para el reconocimiento de las proteínas, en las formas en que se presentan.
2. Conocer losdiferentes métodos de cuantificación de proteínas.
En ésta práctica hemos realizado 6 pruebas utilizando muestras que contenían proteínas, péptidos o aminoácidos libres.

Prueba 1:
En la primera prueba, llenamos 4 tubos con 1 ml de albúmina de huevo y a cada tubo se le echó 1 ml de las siguientes sustancias: acetona/metanol, HCl/NaOH 40%, ClNa 20% y el último tubo con el mililitro de albúmina sepuso a 100ºC.
Resultados:
Pudimos comprobar que las sustancias resultantes contenían coágulos que eran las proteínas de la muestra tomada de albúmina de huevo desnaturalizadas. Las aplicar los distintos métodos desnaturalizantes a la albúmina de huevo, pudimos comprobar que el segundo (aplicar HCl y NaOH al 40%) fue el más efectivo.

Prueba 2 (Reacción del Biuret):
En la segunda prueba,rellenamos 4 tubos con 1 ml de 4 muestras distintas. Esta vez, el método que vamos a practicar es la reacción de Biuret, que es un método que detecta la presencia de compuestos con dos o más enlaces peptídicos y, por tanto sirve para todas las proteínas y péptidos cortos.
A los 4 tubos que contienen una muestra distinta cada uno, se le añade 1 ml de Biuret y 1 ml de NaOH al 20% a cada uno.
Resultados:En el tubo 1 se observa que tras la reacción el contenido se torna de un azul bastante oscuro, por lo que claramente es positiva y la muestra contiene proteínas.
En el tubo 2, aunque de un azul más claro que en el tubo uno, la reacción también cambia de color considerablemente por lo que la también es positiva y contiene proteínas.
En el tubo 3 obtenemos el mismo resultado que en el tubo 1 y lareacción se torna azul oscuro, por lo que deducimos que dicha reacción es también positiva y que la muestra contiene proteínas.
En el tubo 4, al contrario que en el resto de los tubos, la reacción del interior no se torna azul oscuro, por lo que podemos afirmas que no contiene proteínas.

Prueba 3 (Reacción de Ninhidrina):
En la tercera prueba, volvemos a hacer lo que en la prueba anterior yrellenamos 4 tubos con 1 ml de las 4 muestras distintas que poseemos. En esta ocasión, el método a utilizar es la reacción de Ninhidrina, que es un método que nos permite detectar y cuantificar aminoácidos libres.
A los 4 tubos que ya tenemos preparados, les añadimos un ml de Ninhidrina y seguidamente, los incubamos durante 1 minuto a 100ºC. Por defecto, este método tiende a dar falsospositivos, por lo que antes de incubar las muestras hay que observar el estado en el que se encuentran.
Resultados:
En los tres primeros tubos obtenemos el mismo resultados, tras añadir la Ninhidrina, debido a su color la reacción se torna amarillenta, lo que nos indica el negativo, estos tubos no poseen aminoácidos libres.
Al contrario que en estos tres tubos anteriores, el cuarto tubo sí que muestraun claro positivo al añadirle la Ninhidrina ya que se torna oscuro.
Tras sacar los tubos de la exposición a altas temperaturas todos se mostraban positivos, aquí demostramos el defecto del cual hablábamos anteriormente.

Prueba 4 (Reacción Xantoproteica):
En la cuarta prueba, al igual que en la 2 y la 3, vertemos en 4 tubos 1 ml de las 4 muestras distintas que llevamos utilizando desde elprincipio. Esta vez, el método que vamos a emplear es la reacción xantoproteica, que detecta aminoácidos que posean grupos fenilo como lo pueden ser la tirosina, el triptófano y la fenilalanina.
A los 4 tubos que tenemos ya preparados, les añadimos 1 ml de HNO3 concentrado. A continuación, los mezclamos e incubamos durante 3 minutos a 100ºC. Seguidamente, colocamos los tubos en hielo y les...
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