LABORATORIO_3

Universidad Técnica Federico Santa María
Departamento de Ingeniería Química y Ambiental

Laboratorio de Introducción a la Microbiología
Practico N° 3
“RECUENTO BACTERIANO Y ANÁLISIS DE AGUA”

CRECIMIENTO BACTERIANO
Introducción
Crecimiento es el incremento ordenado de todos los componentes de un
organismo. La multiplicación celular es una consecuencia del crecimiento. En organismos
unicelularesla multiplicación conduce a un aumento en el número de individuos dando
lugar a una población o aun cultivo.
El crecimiento microbiano puede medirse en términos de concentración celular
(número de células por unidad de volumen de cultivo) o densidad celular (peso seco de
las células por unidad de volumen de cultivo). Estos dos parámetros no siempre son
equivalentes, debido a que el promedio de pesoseco de la célula varía en las distintas
etapas de la historia del cultivo.

Cinética exponencial
Durante la fase exponencial de crecimiento, la tasa de incremento de la masa
bacteriana en un tiempo determinado es proporcional a la masa presente:
dB/dt = B

(1)

donde B es la masa bacteriana, t el tiempo y  la tasa constante de crecimiento
instantáneo para cada cultivo concreto ( es decir elaumento relativo por unidad de
tiempo) Por tanto:
dB/B = dt (o d ln B = dt)

(2)

Bt = Bo et; e integrando: (3)
lnBt/Bo = t, o ln Bt = ln Bo + t

(4)

Por tanto, durante esta fase, la representación gráfica del logaritmo de B frente al
tiempo da lugar a una línea recta. Esta gráfica semilogaritmica suele ser la que se emplea
para representar curvas de crecimiento bacteriano. Suele ser útilexpresar la tasa de
crecimiento como tiempo de duplicación (tD), denominado también tiempo medio de

Universidad Técnica Federico Santa María
Departamento de Ingeniería Química y Ambiental

generación (TMG). Este valor se obtiene asignando a Bt el valor 2Bo en la ecuación 4 (
es decir, el doble):
ln Bt/Bo = ln2 = tD
tD = (1/) ln 2 = 0,69 (1/)
1/tD =  = 1,45
El valor recíproco del TMC,  (=1/tD), es la tasa constante de crecimiento
exponencial, expresada en generaciones por hora. Su valor es 1,45 veces mayor que la
tasa constante de crecimiento instantáneo , ya que el valor de B, y, por tanto, de B,
aumenta continuamente durante el crecimiento exponencial, y cuando se duplica la masa
bacteriana, la tasa de síntesis celular se duplica con respecto al instante inicial (ver
Figura degráfica).

RECUENTO DE MICROORGANISMOS
El recuento es un procedimiento que permite conocer el número de
microorganismos que hay en una muestra. Para este propósito, existen diferentes
métodos mediante los cuales se pueden contar microorganismos vivos (recuento de
viables), o bien vivos y muertos (recuento de totales). A su vez todos los tipos de
recuento, se pueden clasificar en directos e indirectos.Un recuento directo es aquel en el
que se cuentan las células por observación directa al microscopio, y el recuento indirecto
es aquel en el que se determina el número por crecimiento o alguna propiedad de los
microorganismos.

Universidad Técnica Federico Santa María
Departamento de Ingeniería Química y Ambiental

1.- Recuento de Totales
a) Recuento de Breed
Es un método que entrega recuento detotales. Se utiliza para recuento de
microorganismos en la leche.
Para realizar este método usted, sobre un porta objetos limpio y desengrasado
dibuje con un lápiz un cuadrado de un centímetro cuadrado.
Homogenice la muestra problema y con una pipeta Pasteur coloque una gota de
la muestra (aproximadamente 0,01 ml) sobre el cuadrado y extiéndala bien sin salirse de
él.
Seque y fije al calorsuavemente, luego cubra la extensión con cristal violeta
durante un minuto. Lave con agua y seque.
Observe al microscopio con aceite de inmersión.
Cuente el número de microorganismos en varios campos, no menos de 5. Luego
calcule el promedio de microorganismos contados y multiplique por 3000 (área del
campo del microscopio) y por 100 (inverso del inoculo colocado en el cuadrado).
Nº de células/ml = X...