Manejo de muestras para estudios moleculares

MANEJO DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA ESTUDIOS MOLECULARES
Diagnóstico molecular:
Primer paso del diagnostico molecular comienza con la obtención de la muestra clínica adecuada. Para ello es preciso conocer los posibles agentes etiológicos de las enfermedades infecciosas y los mecanismos patógenos de los mismos.
¿Qué se quiere diagnosticar?
* Enfermedades adquiridas “infecciosas”:bacterias, virus, hongos, parásitos.
* Enfermedades genéticas
* Enfermedades multifactoriales
Tipos de estudio
BIOQUÍMICO | MOLECULAR |
Proteinas | Ác. Nucleicos |
Material recibclable | Material nuevo |
Limpieza | Esterilidad |
Baja sensibilidad | Alta sensibilidad |

Se debe evitar la contaminación cruzada entre analista y muestra biológica.
Manejo de muestras para estudiosmoleculares:
1. Selección del tipo de muestra
2. Toma y conservaciónd e la muestra
3. Análisis de la muestra: estudio molecular de elección.
Técnicas de biología molecular aplicadas al Dx molecular:
Todo estro requiere la extracción del DNA, RNA y proteínas. Estos aspectos se desarrollan en 3 etapas:
1. Preanalitica: Desde la obtención y preparación preliminar de la muestra inicialhasta su transporte al laboratorio.
2. Analítica: procedimientos para la extracción de los ácidos nucleicos. Procedimiento de la realización del método.
3. Post analítica: informe aalítico. Resultado y mostrar resultados al paciente.
Diagnostico molecular:
* Solicitar estudio adecuado
* Tomar la muestra indicada en condiciones óptimas
* Realizar la extracción de los acidosnucleicos en condiciones adecuadas utilizando inhibidores de RNAsas y DNAsas (nucleasas)
* Almacenar los ácidos nucléicos hasta su uso (-70°)
Obtencion y preparación preliminar de las muestras:
* De órganos, tejidos, fluidos biológicos dependiendo del tipo de análisis u objetivo perseguido (clínico, identificación de individuos, tipo de célula, tipo de genoma, tipo de estudio).
Muestrasde suspensiones celulares:
* Celulas embrionarias
* Liquido amniótico (12 semana de gestación)
* Celulas de tejido o sangre fetal(fetoscopia, cordocentesis)
* Celulas de la sangre o medula osea (fracción celular total o sus diferentes tipos)
* Muestras bucales
* Semen
* Celulas en cultivo
* Muestras celulares de liquidos extravasculares (LCR, Liquido sinovial)* Muestras de sangre por punción venosa.
Selección del tipo de muestra:
* Enfermedades adquiridas
* Virus (VHB, VHC, VIH)
* Bacterias (tuberculosis)
* Hongos (Aspergellius)
* DNA Viral, RNA viral, DNA bacteriano
* Se extrae de: suero, biopsia, expectoración, orina, LCR.
* Alteraciones genéticas (monogenéticas)
* Distrofia M. Duchenne
*Anemia células falciformes
* Hipercolesterolemia familiar
* Deficiencia de alfa-aminotripsina
* Muestra por punción venosa y se busca DNA
* Leucocitos, muestra oral
* Enfermedades multifactoriales o poligénicas: Inovulcra genes y factores ambientales.
* Diabetes
* Cirrosis
* Cancer
* DNA: Para alteraciones en genes
* RNAm: expresión de losgenes (proteína)
* Se obtiene de: leucocitos, biopsia, suero o plasma.
Variables críticos en la toma y conservación de la muestra
* Identificar la muestra
* Uso de mateiral nueo esteril
* Uso de guantes
* Entrega inmediata al laboratorio
* En caso de espera, separación inmediata del suero. Transortar en nitrógeno líquido conservación a -20°C o -70°C
* Llenado deficha o solicitud
Fuentes de contaminación
1. Analista
2. Material
3. Soluciones
4. Reactivos
Si el analista contamina las muestras:
* Nucleasas (falsos negativos) degradaciones
* Contaminar unas muestras con otras (falsos positivos) contaminaciones.
El analista se contamina con las muestras
* Microorganismos infecciosos: virus, bacterias, hongos
* Sustancias...