Organismos

¿Sab´ıas que existen microorganismos que no hemos podido cultivar?
Humberto Gonz´alez y Reyna Fierro
Recibido: 26 de noviembre de 2008
Aceptado: 18 de febrero de 2009

nes ribosomales que se encuentran en todas las bacterias. Los fragmentos sintetizados se pueden clonar
en vectores o se determina su secuencia nucleot´ıdica directamente. Las secuencias obtenidas de los genes del RNA ribosomal secomparan con las existentes en los bancos de datos (ej. Ribosomal Database Project [6]), hay m´as de 30,000 secuencias existentes de un n´
umero casi igual de especies bacterianas. Con este enfoque, se ha revelado una diversidad de microorganismos que no es posible detectar con los m´etodos de microbiolog´ıa tradicional [4,
13, 21]. Tambi´en existen programas (tanto libres como comerciales) paraverificar que las secuencias obtenidas de ADN ambientales no sean artefactos o
quimeras (h´ıbridos de genes de diferentes microorganismos) [11]. Si las secuencias no se parecen a la
de ning´
un microorganismo existente en m´as de un
97 %, es posible que se trate de una bacteria nueva, tal vez a´
un no cultivada. La secuencia obtenida permite tambi´en identificar fragmentos de secuencia que no seencuentran en ninguna otra especie reportada, o sea que son exclusivos de esta especie. Estas secuencias particulares pueden sintetizarse marcadas con nucle´
otidos fluorescentes y pueden utilizarse en las muestras originales para ver al microscopio de epifluorescencia o confocal, el tipo y distribuci´on de las bacterias que presentan los genes
marcados.

La vida en la tierra tiene muchasmanifestaciones,
desde animales y plantas de gran tama˜
no, hasta microorganismos. Todos juegan un papel muy importante en la naturaleza. Si se toma una muestra de tierra, se coloca en agua est´eril, se agita y se inocula medio de cultivo rico en nutrientes, se esperar´ıa que todas las bacterias y hongos presentes, se desarrollaran en ese medio. Sin embargo, esto no es as´ı, ya que
por medio de t´ecnicas debiolog´ıa molecular, particularmente la Reacci´
on en Cadena de la Polimerasa (PCR), se ha descubierto la existencia de microorganismos que no se desarrollan en los medios de cultivo com´
unmente utilizados y que, hasta la fecha, no
se han podido cultivar en el laboratorio. A estos microorganismos se les ha dado el nombre de “microorganismos no cultivables” [8, 14].
Estos microorganismos nocultivables viven, se desarrollan y se dividen en condiciones muy particulares,
y ¡no se han podido cultivar en el laboratorio!. En este trabajo se describe c´omo se descubri´
o que existen estos microorganismos y se discute por qu´e no
se han podido cultivar en en laboratorio.
En general, para obtener muestras del DNA de cualquier organismo, se requiere una cantidad considerable de material; paraobtener dicho material, se cultiva al organismo y se colectan las c´elulas por centrifugaci´
on, a este paso se le llama enriquecimiento. Con el avance de la tecnolog´ıa, se ha logrado aislar DNA de: muestras de aire filtrado a trav´es de tamices que logran detener microorganismos; esto se
ha realizado en una diversidad de suelos que no tienen se˜
nales de vida, del interior de plantas y de aguas
oce´anicas o de fuentes termales, sin pasar por el paso de enriquecimiento, o sea sin cultivar a los microorganismos. Este DNA se usa como molde para la amplificaci´on, por PCR, de los genes ribosomales existentes en la muestra. Esta t´ecnica se realiza con una DNA-polimerasa termoestable y oligonucle´
otidos complementarios (primers, o cebadores
universales) con las regiones conservadas de los ge-Visualizar a las bacterias es un paso hacia su aislamiento, pero cultivar a muchas de las que han sido detectadas de este modo, ha sido dif´ıcil. Whitesides en 1997 logr´o cultivar bacterias del g´enero Vibrio de un estado no cultivable, aunque es importante resaltar que el desarrollo de estas bacterias se inhibe con altas concentraciones de nutrientes [20], y estos resultados se prestaron a...