Pruebas bioquimicas

Facultad de Odontologia

INFORME DE CLASE  PRÁCTICA  Nº 6
DETERMINACIÓN DE ENTEROBACTERIAS

INTRODUCCION
Las pruebas bioquímicas consisten en distintos test químicos aplicados a medios biológicos, los cuales, conocida su reacción, nos permiten identificar distintos microorganismos presentes.
Su sistema de funcionamiento generalmente consiste en determinar la actividad de una víametabólica a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer incorpora o no.
Para realizar las pruebas bioquímicas se dispone de múltiples medios. La determinación se realiza mediante 3 pruebas bioquímicas que permiten aislar e identificar rápidamente diversos microorganismos:TSI ,LIA Y MIO.
El test LIA es un medio que requiere un procedimiento deinoculación especial que entrega datos fisiológicos importantes para determinar si un microorganismo es: fermentador de glucosa, fermentador de lactosa, productor de gas ,productor de ácido sulfhídrico, permite diferenciar los microorganismos que producen descarboxilación o desaminación de la lisina y detectar además la producción de H2S.entrega datos fisiológicos importantes para determinar si unmicroorganismo es: fermentador de glucosa, fermentador de lactosa, productor de gas ,productor de ácido sulfhídrico.
Durante las primeras etapas de la incubación el fondo virará el indicador de pH del medio al ácido (amarillo) por la fermentación de glucosa. Luego, si el aminoácido es descarboxilado se formarán aminas que provocan un retorno al color original del medio o hacia un viraje al básico(color violeta).
En la desaminación se produce un ácido carboxílico y NH3 y se visualiza en la superficie la aparición de un color rojo intenso. La producción de H2S a partir de tiosulfato se visualiza por la precipitación de sulfuro ferroso de color negro.
El TSI (agar triple azúcar hierro) es un medio nutriente y diferencial que permite estudiar la capacidad de producción de ácido y gas a partir deglucosa, sacarosa y lactosa en un único medio. También permite la detección de la producción de H2S. Es un medio útil para la identificación de enterobacterias.

Al crecer un microorganismo en el TSI, el pico tiende a virar al pH alcalino (color rojo por el rojo fenol) por la producción de aminas, debido a la utilización aerobia de las peptonas. En el fondo del tubo, donde no hay oxígeno, ladegradación de peptonas es menor y no se generan aminas, de manera que se puede detectar la producción de pequeñas cantidades de ácido (color amarillo por el rojo fenol). Si se inoculan bacterias no fermentadores no se formarán ácidos, pero por la producción de aminas en el pico, todo el medio quedará rojo.
La glucosa en el TSI está en una proporción 10 veces menor que la lactosa y la sacarosa.Si el TSI es inoculado con una bacteria fermentadora de glucosa pero no de lactosa ni de sacarosa, la cantidad de ácido producida por fermentación será baja (porque la cantidad de glucosa inicial es baja). En las primeras horas (10 a 16hs) de incubación se producirá viraje del indicador al amarillo en todo el tubo (pico y fondo), pero al continuar la incubación, el pico del tubo retornará al rojopor la producción de aminas debida a la degradación aerobia de las peptonas antes descrita.
Si la bacteria fermenta la lactosa y/o la sacarosa, como las concentraciones de estos azúcares son 10 veces mayores a la glucosa, se producirá gran cantidad de ácido (que no puede ser neutralizado por la producción de aminas en la superficie), por lo tanto todo el tubo (pico y fondo) virará al coloramarillo (ácido).
La producción de H2S a partir de tiosulfato se pone en evidencia por precipitación del sulfuro ferroso (negro). Como esta reacción se da preferencialmente en medio ácido, un ennegrecimiento del fondo del tubo (que puede cubrir todo el fondo del tubo y enmascarar el color amarillo) se lee como fermentación de algunos de los azúcares del medio. Además puede observarse la producción...