Trabajo De Quimica

Centrifugación

La centrifugación es una técnica de sedimentación, acelerada gracias al uso de fuerza centrífuga. Se aplica al análisis o a la separación de mezclas de partículas, células, orgánulos o moléculas.
Instrumental
1. Tubos
De vidrio o plástico. Resistentes químicamente (disolventes, reactivos) y físicamente (tensión a las velocidades elevadas que se emplean). Diversos tamaños yformas. Plásticos especiales para altas velocidades.

2. Centrífugas
Se puede regular velocidad, tiempo, temperatura. Elevadas velocidades (102-105 rpm).
3. Rotores
Dos tipos:
rotor angular o de ángulo fijo
rotor basculante
 


Modalidades
Según la velocidad:
 
Criterio aproximado:
Centrifugación a baja velocidad
menos de 10.000 rpm
Centrifugación a alta velocidad
entre 10.000 y 20.000 rpmUltracentrifugación
más de 20.000 rpm
Según el propósito:
1. Centrifugación analítica
Objetivo: medir las propiedades físicas de las partículas que sedimentan, tales como su coeficiente de sedimentación o su masa molecular. Especialmente en la variante ultracentrifugaciónanalítica.
Las moléculas se observan mediante un sistema óptico durante la centrifugación. Los tubos de centrífuga deben ser de cuarzo paradejar pasar la luz visible y ultravioleta. Rotor basculante, observación en vertical.
2. Centrifugación preparativa
De uso más común. Objetivo: aislar partículas, células o moléculas para su análisis o utilización posterior. En general, se emplea mayor cantidad de muestra que en la analítica.
Según el medio en el que se centrifuga y la forma como se aplica la muestra:
1. Centrifugación diferencial(También llamada de frontera móvil). El tubo se llena con muestra y se centrifuga. El comportamiento de cada componente de la muestra depende de su forma, tamaño, densidad y, lógicamente, de las condiciones de centrifugación. Se obtienen sólo 2 fracciones: sedimento y sobrenadante.
[Nota: la palabra precipitado es más adecuada para algo insoluble, que precipita por centrifugación o por otrosmecanismos (por ej., una reacción química); sedimento es más correcto para lo que se ha forzado a ir al fondo pero seguiría siendo soluble; pellet es una palabra inglesa para lo que queda compactado en el fondo como consecuencia de la centrifugación]
Una aplicación típica es el fraccionamiento subcelular (separación de los distintos componentes de una célula, principalmente de los orgánulos) (véaseLuque o Alberts) empleando sucesivas centrifugaciones a velocidad creciente.

2. Centrifugación zonal o de velocidad de sedimentación
La muestra se aplica en una capa delgada sobre el medio de centrifugación, que es un gradiente de densidad. Bajo la fuerza centrífuga, las partículas sedimentan a través del gradiente concentrándose en zonas o bandas discretas. Su velocidad de avance (y, por tanto, elmecanismo de la separación) depende de su tamaño, forma y densidad; todos estos parámetros se combinan en el coeficiente de sedimentación,
Coeficiente de sedimentación=s=velocidad de sedimentaciónaceleración centrífuga
que se mide en unidades svedberg (1 S = 10−13 segundos).
La centrifugación debe terminar antes de que alguna de las partículas separadas llegue al fondo del tubo. Los componentesseparados se recogen individualmente aspirando con mucho cuidado las diferentes bandas o, mejor, perforando el fondo del tubo y recogiendo en fracciones el líquido que cae.
Puede verse una animación de la separación.
El gradiente de densidad se crea mediante un gradiente de concentración: concentraciones crecientes, al bajar en el tubo, de un componente adecuado. Se usan para ello sacarosa, clorurode cesio, albúmina, suero fetal bovino..., o medios comerciales como Ficoll –un polisacárido sintético–, Percoll, metrizamida....
Se puede preparar:
a) un gradiente discontinuo o escalonado, manualmente
b) un gradiente continuo, empleando un dispositivo formador de gradientes 
c) un gradiente continuo autoformado, si se crea mediante centrifugación, normalmente a la vez que se fracciona la...