transgenesis y clonacion
Páginas: 21 (5023 palabras)
Publicado: 21 de octubre de 2013
TRANSGENESIS Y CLONACION.
DANIEL HERNANDO LEON PIMIENTO.
UNIDADES TECNOLOGICAS DE SANTANDER.
TECNOLOGIA EN DESARROLLO DE SISTEMAS INFORMATICOS.
BUCARAMANGA
2013
CLONACION.
Se utilizan con frecuencia dos tipos de vectores de clonación: plásmidos y virus. De introducirlos en las células hospedadoras.
Plásmidos. Son moléculas de adn circular,con un tamaño menor que el del cromosoma. Se replican con independencia del cromosoma bacteriano ya que tienen su propio origen de replicación.
En esta secuencia de dibujos se puede ver como se realiza la inserción de un gen en un plásmido
Figura a
En la figura a tenemos un gen (color rojo) que interesa insertar en un plásmido (color turquesa)
Figura b
En la figura b, vemos como unaenzima de restricción ha cortado el gen y el plásmido, quedando unos bordes cohesivos o pegajosos.
Figura c
La unión del adn que contiene el gen que se desea clonar con el vector de clonación, se realiza por medio de otras enzimas, denominadas adn-ligasas, que unen ambos trozos de adn. El resultado es una molécula de adn recombinante, ya que contiene fragmentos de adn de distinta procedencia.Genomas de otros virus. El proceso es similar, se trata de insertar el gen deseado en un fragmento de adn vírico (figura d) posteriormente se ensamblarán las distintas partes del virus (figura e). Así quedará el virus completo (figura f).en el siguiente paso se insertará este adn por el proceso de la transducción.
Figura d
Figura e
Figura f
otros genes denominados marcadores, que sirven paraidentificar las células que contienen el vector de clonación. Se suelen utilizar como marcadores, genes de resistencia a antibióticos y genes de bioluminiscencia.
Genes de resistencia a antibióticos. Sirven para identificar bacterias que contienen el vector de clonación, porque estas bacterias serán resistentes al antibiótico del gen marcador.
Genes de luminiscencia. En este caso, la célula quecontenga el gen que se quiere clonar, tendrá la propiedad de emitir luz, ya que el marcador que se le incorpora determina que se exprese esa característica. Este sistema se emplea cuando la célula hospedadora es una célula eucariota.
Métodos de introducción del vector
El siguiente paso será introducir el vector de clonación que contiene el gen que se quiere clonar en la célula hospedadora, paraque ésta, al multiplicarse, origine un clon celular que lleve el gen concreto.
Existen varios métodos que dependerán del tipo de célula fundamentalmente.
En bacterias (células procariotas), mediante estos procesos:
Transformación. Ocurre espontáneamente en ciertos tipos de bacterias y se consigue artificialmente sometiendo a la célula bacteriana a tratamientos físicos y químicos.
La célulacapta moléculas de adn que se encuentran en el medio externo, las introduce en su interior y las incorpora a su genoma.
1
2
3
4
Transducción. Este método consiste en introducir el adn en la célula hospedadora mediante un virus, utilizando como vector de clonación el genoma del virus.
En la siguiente figura puede verse el proceso en tres etapas. El número 1 corresponde al virus aproximándose auna bacteria. Se puede observar cómo lleva un genoma ya con el gen que interesa clonar. El siguiente momento 2, corresponde al contacto entre el virus y la pared bacteriana, en cuya zona de contacto se produce un poro por donde como vemos en la etapa 3, el virus inyecta su adn al interior de la célula bacteriana.
1
2
3
Clonado del ADN
Una vez que se ha conseguido la población de bacteriastransformadas, (recuerda que llevan además del gen de interés un gen por ejemplo de resistencia a un antibiótico por ejemplo un gen de resistencia a la ampicilina), por lo que las bacterias que se consideran transformadas, serán aquellas que sobrevivan.
El siguiente paso es poner a las bacterias en un medio de cultivo apropiado para que se multipliquen. A la vez que se reproducen las bacterias...
DANIEL HERNANDO LEON PIMIENTO.
UNIDADES TECNOLOGICAS DE SANTANDER.
TECNOLOGIA EN DESARROLLO DE SISTEMAS INFORMATICOS.
BUCARAMANGA
2013
CLONACION.
Se utilizan con frecuencia dos tipos de vectores de clonación: plásmidos y virus. De introducirlos en las células hospedadoras.
Plásmidos. Son moléculas de adn circular,con un tamaño menor que el del cromosoma. Se replican con independencia del cromosoma bacteriano ya que tienen su propio origen de replicación.
En esta secuencia de dibujos se puede ver como se realiza la inserción de un gen en un plásmido
Figura a
En la figura a tenemos un gen (color rojo) que interesa insertar en un plásmido (color turquesa)
Figura b
En la figura b, vemos como unaenzima de restricción ha cortado el gen y el plásmido, quedando unos bordes cohesivos o pegajosos.
Figura c
La unión del adn que contiene el gen que se desea clonar con el vector de clonación, se realiza por medio de otras enzimas, denominadas adn-ligasas, que unen ambos trozos de adn. El resultado es una molécula de adn recombinante, ya que contiene fragmentos de adn de distinta procedencia.Genomas de otros virus. El proceso es similar, se trata de insertar el gen deseado en un fragmento de adn vírico (figura d) posteriormente se ensamblarán las distintas partes del virus (figura e). Así quedará el virus completo (figura f).en el siguiente paso se insertará este adn por el proceso de la transducción.
Figura d
Figura e
Figura f
otros genes denominados marcadores, que sirven paraidentificar las células que contienen el vector de clonación. Se suelen utilizar como marcadores, genes de resistencia a antibióticos y genes de bioluminiscencia.
Genes de resistencia a antibióticos. Sirven para identificar bacterias que contienen el vector de clonación, porque estas bacterias serán resistentes al antibiótico del gen marcador.
Genes de luminiscencia. En este caso, la célula quecontenga el gen que se quiere clonar, tendrá la propiedad de emitir luz, ya que el marcador que se le incorpora determina que se exprese esa característica. Este sistema se emplea cuando la célula hospedadora es una célula eucariota.
Métodos de introducción del vector
El siguiente paso será introducir el vector de clonación que contiene el gen que se quiere clonar en la célula hospedadora, paraque ésta, al multiplicarse, origine un clon celular que lleve el gen concreto.
Existen varios métodos que dependerán del tipo de célula fundamentalmente.
En bacterias (células procariotas), mediante estos procesos:
Transformación. Ocurre espontáneamente en ciertos tipos de bacterias y se consigue artificialmente sometiendo a la célula bacteriana a tratamientos físicos y químicos.
La célulacapta moléculas de adn que se encuentran en el medio externo, las introduce en su interior y las incorpora a su genoma.
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Transducción. Este método consiste en introducir el adn en la célula hospedadora mediante un virus, utilizando como vector de clonación el genoma del virus.
En la siguiente figura puede verse el proceso en tres etapas. El número 1 corresponde al virus aproximándose auna bacteria. Se puede observar cómo lleva un genoma ya con el gen que interesa clonar. El siguiente momento 2, corresponde al contacto entre el virus y la pared bacteriana, en cuya zona de contacto se produce un poro por donde como vemos en la etapa 3, el virus inyecta su adn al interior de la célula bacteriana.
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Clonado del ADN
Una vez que se ha conseguido la población de bacteriastransformadas, (recuerda que llevan además del gen de interés un gen por ejemplo de resistencia a un antibiótico por ejemplo un gen de resistencia a la ampicilina), por lo que las bacterias que se consideran transformadas, serán aquellas que sobrevivan.
El siguiente paso es poner a las bacterias en un medio de cultivo apropiado para que se multipliquen. A la vez que se reproducen las bacterias...
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