57816268 Bioqimica PracticA 2

PRACTICA Nº1

1) Explicar el diseño experimental.
Como el objetivo de nuestra practica es demostrar la actividad enzimática determinando para ello la actividad de la ureasa, por conocimiento sabemos que las enzimas son biocatalizadores específicos de naturaleza proteica que actúan acelerando las reacciones químicas en este caso uno de los factores que afectan esta actividad enzimáticaes el tiempo de incubación en los tubos 1 y 2 ( con los componentes indicados en cada uno de ellos) que nos permitió expresar esta actividad en términos de velocidad; es decir, la cantidad de producto formado por unidad de tiempo que generalmente se determina en micromoles de producto formado por minuto, teniendo en cuenta un pH optimo de 7.2 y un temperatura de 37ºC.

Una vez obtenidos lostubos 1 y 2 por sistema de incubación procedemos a la valoración de la actividad de la ureasa por el método de productos formados. Primero lo haremos por reacción de neutralización donde tomamos 1 mL de cada tubo para colocarlos en los tubos 1(B) y 2(B) donde luego añadimos 1 gota de rojo de metilo al 0.04% y lo titulamos con HCL 0.05N observando como punto final un rosa pálido que indicara porfinalizada la titulación. En el tubo (B) observamos que necesito mas acido para lograr neutralizarse. Con los datos obtenidos en esta experiencia se precedio a calcular los resultados en términos de velocidad de reacción o actividad enzimática expresados como micromoles de urea desdoblados por minuto a 37ºC (unidades de ureasa) con un pH optimo de 7.2.

Segundo por reacción de Nessler dondeharemos tres tubos: Blanco, 1 y 2 de acuerdo a los componentes indicados, dejaremos en reposo por 10 minutos y lo leeremos en l fotocolorímetro con filtro verde, o un espectrofotómetro a 540 nm. Lo cual nos permitió hacer cálculos en corrección de lecturas y hallar la velocidad de reacción o actividad de ureasa.

¿Cuál es el propósito de cada tubo?

Observar en cada uno de ellos como se da, quefactores afectan y a qué velocidad se da la actividad enzimática.

¿Cuál es el tubo control?

El tubo control es una solución que contiene una cantidad conocida de sustancia que se va a cuantificar y sirve para tomarla de referencia en el momento en que se mida la muestra real. En este caso actuaron como tubos control: 1, 1 (B) y blanco (como referencia para las tres experiencias) ya que en estos no seformo ninguna base

¿Es necesario más de un tubo control?

No, ya que solo se necesita como referencia.

2) Observe las reacciones en los tubos de titulación y anotar sus observaciones.
Después del sistema de incubación de los tubos 1 y 2; agregamos en los tubos 1(B) y 2(B) 2mL de estos para agregarles rojo de metilo al 0.04 % se observo q en ambos la solución torno amarillentaprocedimos a titular con HCl hasta que torne en ambos una coloración rosa pálido que dará por finalizada esta. Las observaciones en el tubo 1(B) fueron que con solo 0.15 mL se torno al color rosa pálido lo que se indico como tubo control, en el tubo 2(B) para que se torne rosa pálido en la titulación de HCl requirió 2.40 mL lo que se indico como un tubo problema que requiere de más acido para poderneutralizar se.

- Se concluye que el el primer tubo 1 (B) se indico como un tubo control ya que solo contiene una cantidad sustancia que se procederá a cuantificar para tomarla de referencia cuando se mida la muestra real. En el segundo tubo 2(B) se indico como tubo problema porque se formo una base requirió de mas acido ya que en este existe una cantidad de sustancia que servirá para lacuantificación de la velocidad de reacción.

3) Calcule las unidades de la ureasa a partir sus resultados.

vol. Hcl gastado TUBO 1 = 0.15 m l

vol. Hcl gastado TUBO 2 = 2.40 m l

NEUTRALIZACION

VELOCIDAD = (volumen Hcl gastado (problema) – vol Hcl (blanco) )(molaridad) (1000)(4)

(15 minutos ) (2)(2)

VELOCIDAD = (2.40 m l – 0.15 ml...