abstracto

ABSTRACTO
Canino TetraPEGylated Hb, [SP (succinimidophenyl)-PEG5K] 4 -canino-Hb, con PEGilación en sus cuatro residuos de cisteína reactivos (α 111 y β 93 ) se ha preparado y caracterizado. El volumen hidrodinámico y el radio molecular de (SP-PEG5K) 4 -canino-Hb son intermedias a las de di-y hexaPEGylated Hb humana como se esperaba. Sin embargo, la CP (presión osmótica coloidal) detetraPEGylated canino de Hb es más cercano al de la Hb hexaPEGylated humana que a la de diPEGylated humana de Hb. El O 2 afinidad de tetraPEGylated canino de Hb es mayor que la de canino Hb y comparable con la de hexaPEGylated de Hb. El O 2 afinidad de tetraPEGylated canino de Hb no es sensible a la presencia de DPG (difosfoglicerato) o cloruro, pero conserva respuesta casi completa a L-35, un efectoralostérico que interactúa en el αα-final de la cavidad central. El canino tetraPEGylated Hb es vasoinactive en hámster en los estudios de perfusión de carga superior al 10%. También es esencialmente no hipertensiva en un protocolo de intercambio de hemodilución extrema en hámster así como di-y hexaPEGylated humana de Hb. El O 2 entrega por tetraPEGylated canino de Hb es comparable con la de hexaPEGylatedde Hb pero no tan eficiente como diPEGylated de Hb. Estos resultados demuestran que las propiedades de la solución inducidas-PEGilación de PEG conjugados [poli (etilenglicol)]-Hb son dictadas por el nivel y la química de PEGilación y la interacción de estos juega un papel crítico en la oxigenación de los tejidos. Los estudios implican la necesidad de establecer el nivel correcto (y / o patrón) dePEGilación y O 2 afinidad de aductos Hb-PEG en el diseño de O 2 de transporte de expansores del volumen plasmático, y esto sigue siendo el principal desafío en el diseño de Hb PEGilada como sustitutos de la sangre.
Palabras clave: sangre, no hipertensa tetraPEGylated hemoglobina canino, O 2 de afinidad, poli (etilenglicol) (PEG), PEGilación, oxigenación de los tejidos
Siglas: la COP, la presiónosmótica coloidal; DPG, difosfoglicerato; EAF-PEGilación, extensión maleimida PEGilación basada química-brazo-facilitado; FCD, la densidad capilar funcional; Hct, hematocrito; IEF, isoelectroenfoque, MAPA, la presión arterial media; PEG, poli (glicol de etileno); p O2 , la presión parcial de O 2 ; PQM, temple microscopía de fosforescencia; RBC, glóbulo rojo; RP-HPLC, HPLC de fase inversa; SEC,cromatografía de exclusión por tamaño; SP, succinimidophenyl
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INTRODUCCIÓN
Estudios de Rohlfs et al. [ 1 ] y Winslow et al. [ 2 ] muestra que Enzon pegilado Hb bovina no es hipertenso han abierto un nuevo enfoque para neutralizar o enmascarar el 'efecto presor' de Hb acelular.Las propiedades de la solución de Enzon pegilado Hb bovina son únicamente diferentes de otros Hbs modificado enensayos clínicos como sustitutos de la sangre [ 3 - 10 ] y comparable con las de expansores del volumen plasmático. PEGilación de la Hb dota a la molécula con excelentes propiedades de expansión del volumen plasmático [ 11 - 17 ]. Por lo tanto el diseño de Hb con propiedades de la solución de expansores del volumen de plasma parece ser una nueva estrategia para neutralizar el vasoactividad de Hb [ 18 ].Para evaluar y desarrollar más este concepto, hemos desarrollado un protocolo sencillo para la PEGilación de proteínas [ 19 , 20 ] denomina 'EAF-PEGilación (brazo facilitado extensión maleimida química basada PEGilación)'. Este enfoque tiolación y la química de maleimida basado [ 19 - 21 ] se ha optimizado para generar un hexaPEGylated de Hb, [SP (succinimidophenyl)-PEG5K] 6 -Hb. Este productoexhibe una inusualmente alto volumen hidrodinámico para su masa (masa molecular es sólo ~ 94 kDa, pero su volumen molecular es comparable con la de una proteína globular con una masa molecular de 256 kDa), comparativamente alta viscosidad y CP (presión osmótica coloidal ) y es esencialmente vasoinactive y no hipertensos [ 20 - 22 ]. La no hipertensiva Enzon Hb PEGilada tiene diez cadenas PEG5K...