Actividad Enzimática De La Α-Amilasa

Trabajo Práctico 4

Actividad enzimática de la α-amilasa





Profesores:

❖ Pelisch, Federico
❖ Luzzani, Carlos
❖ Godoy Herz, Micaela




Alumnas: Grupo 8

❖ Cóceres, Araceli
❖ Lopez, Yamila
❖ Undery, Jacqueline
❖ Villa, Agostina
INTRODUCCIÓN:
Una enzima es molécula orgánica, proteica o de ARN (ribozimas) que funcionan como catalizadoresbiológicos. De esta manera, disminuyen la energía de activación acelerando las reacciones químicas sin resultar alteradas.
Son altamente específicas, se unen a uno o más ligando denominados sustratos, transformándolos en uno o más productos químicamente modificados.
La actividad se puede detectar si hay aparición de producto o desaparición de sustrato, o cantidad de producto generado, en función deltiempo. Esta actividad puede verse afectada o modificada por variables del entorno tales como cambios de pH, temperatura, concentraciones de sales (iones), etc. La caracterización de una enzima implica determinar las condiciones optimas para su actividad, así como describir su naturaleza química (si es proteica o de RNA, si tiene uno o mas sitios de unión, si interactúa con inhibidores oactivadores, etc.
La alfa-amilasa es una enzima proteica que se encuentra en la saliva humana cuya función es catalizar la degradación del almidón (sustrato). Representa la primera instancia de degradación de azucares en el proceso de la digestión. El almidón (polisacárido de reserva de las plantas) está formado por dos tipos de moléculas: la amilosa y la amilopectina (ambas polímeros de glucosa). Laamilosa esta conformada por cadenas (lineales) de glucosa unidas por enlaces glucosídicos C1 con C4 de otra cadena, mientras que la amilopectina tiene además del ultimo enlace mencionado, unicones C1 con C6 formando cadenas ramificadas. La alfa-amilasa rompe uniones C1-C4 tanto en la amilopectina como en la amilosa dejando dextrinas lineales y ramificadas (oligosacáridos conformados por unidades deglucosa) como producto. Finalmente, estas dextrinas seguirán su curso, a través de las distintas fases de la digestión, hasta volcarse en el torrente sanguíneo para llegar a las células e ingresar al interior para ser utilizados en alguna de las funciones en que participan (energética, de reconocimiento, estructural o como precursoras de otras moléculas).

Para este trabajo se usa el testcolorimétrico para medir dicha actividad que revela la presencia de almidón en la solución. La enzima a estudiar es la α amilasa, degradadora de almidón.

Siguiendo la reacción, detectando la desaparición de sustrato el almidón en presencia de yodo se encuentra de color azul. Cuando se agrega la enzima, la interacción entre yodo y almidón se interrumpe y el color azul desaparece de la solución.
Lasolución con yodo se la conoce como solución de Lugol.

¿Para qué se determina la dilución óptima y el tiempo de referencia?
El tiempo de referencia es el tiempo en el que queremos que la reacción suceda, y la dilución óptima es la dilución que debemos aplicarle a la muestra de saliva para lograr alcanzar el efecto acromático dentro del tiempo de referencia. Usando la misma disolución podremos evaluarlos efectos de los distintos tratamientos observando los resultados en la variación del tiempo de referencia.

OBJETIVO: Estudiar la actividad enzimática de la α-amilasa salival y caracterizar dicha actividad de dicha actividad.



DESARROLLO:
Se recolecto una muestra de saliva de aproximadamente 5 ml en un vaso de precipitado pequeño. Se midió el pH de la misma con el papel indicadordado.
Diluimos la saliva 1/5 en un tubo de ensayo y mezclamos por inversión suavemente y sin agitar.
Por un lado, los docentes nos entregaron a cada grupo un tubo de ensayo con 10 ml de solución neutra de almidón 1% m/v colocado en un baño térmico de 37º C de al menos 2 minutos. Por el otro lado, hicimos una dilución de 200 ml de H2O con 40 gotas de Lugol, esa solución preparada previamente en...