AD1008101

UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID
DEI>ARTAMENTO DE BIOLOGIA MOLECULAR

“PROTEINAS DE SECRECION DEL EPIDíDIMO DE CONEJO:
CARACTERIZACION Y REGULACION POR ANURO GENOS Y
TEMPERATURA”

TESIS DOCTORAL

FRANCISCO IGNACIO REGALADO SANCHEZ
MADRID, 1992

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U.UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID
DEPARTAMENTO DE BIOLOGíA MOLECULAR

“PROTEÍNAS DE SECRECION DEL EPIDIDIMO DE CONEJO:
CARACTERIZACION Y REGULACION POR ANDROGENOS Y
TEMPERATURA”

Memoria que para optar al grado de
Doctor en Farmacia
presenta el licenciado

FRANCISCO IGNACIO REGALADO SANCHEZ

MADRID,

1992

ANTONIo NIETo LOPEZ, Investigador Científico
dcl Centro cte Biología Molecular del C.S.I.C.CERTIFICA: qUe
realizado bajo mi
Proteínas de
caracterización
temperatura

Francisco Ignacio Regalado Sánchez ha
dirección el trabajo titulado
secreción del epidídimo de conejo:
y
regulación
por andrógenos
y

Considero el trabajo rea[izado satisfactorio y apto para
ser presentado corno tesis doctoral en I)epartarnento de
Bioquímica y Biología Molecular de la Facultad de
Farmacia de la UniversidadComplutense de Madrid

Y para que así conste donde proceda, expido el presente
certificado en Madrid a doce de Junio de mil novecientos noventa y
dos.

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absorbancia a 260 nm
ácido acéticoben zol 1— L— arg ini ti a-p -¡1 itroanili da
5-brorno-4-cloro-3-indolij fosfato
ácido desoxirribonucleico complementario
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medio esencial mínimo de Dulbecco
ácido deoxirribonucleico
cloruro cíe dansilo
de o xi ti m idin a
ditiotreitol
ácido otilen —diaminotetracético
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cromatografía líquida de alta resolución
inmunoglobulina O
ácido ribonucleico mensajero
nitro bine tetrazoliumácido 2-nitro, 5 tiocianobenzoico
electroforesis en gel de poliacrilamida
CINa 154mM tamponado con fosfato lmM
PBS couil% Triton X-IO0 (y/y)
PBS con 4% ovoalbúniina (p/v)
PBS con 0.05% Tween-20 (y/y)
2,5-difeniloxazol
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ácido ribonucleico
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dodecil si¡Jfato de sodio
ácido tricloroacético
N ,N ,N ,N’ te trarnetiletil end i amin a
ácido trifluoroacéticocromatografía en capa fina
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INTRODUCCION
1. EL EPIDíDIMO: ESTRUCTURA

1

2. FUNCION DEL EPIDíDIMO
2.1.- Maduración del espermatozoide en el epidídimo
2.2. Capacidad fertilizante
2.2.1.- Motilidad del espermatozoide
2.2.2.- Capacitación
2.2.3.- Reacción acrosomal

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3
3
4
4
5

-

3. PRODUCTOS DE SECRECION DEL EPIDíDIMO Y SU
REGULACION
3.1.-Secreción y resorción de proteinas epididimales
3.1 .1 Origen de las prweinas epididirnales
3.1.1.1.- Torrente circulatorio
3.1.1.2. Fluido testicular
3.1 .1.3.- Biosíntesis epitelial
3.1.2.- Precurscnrs para la síntesis proteica
3.1.2.1.- Aminoácidos
3.1.2.2
Azúcares
3.1.2.3.- Fosfato
3.1.3.- Secreción proteica en el epidídimo
3.1.4.- Resorción proteica en. el epidídimo
3.2.— Regulación androgénica deproteinas
epididimales de secreción
3.3.- Regulación por temperatura de la función del
epidídimo
.-

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4. LOS RETINOIDES EN LA FUNCION DEL TESTICULO Y
EPIDíDIMO

OBJETIVOS

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MATERIALES Y METODOS
1. MATERIALES
1.1.— Animales de experimentación
1 .2.- Productos

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2. METODOS
2.1.- Tratamientos
2.2.- Espermatozoides y fluido epididimal
2.3.- Cultivo deexplantes
2.4. Electroforesis en geles de poliacrilamida
2.5.- Técnicas inmunológicas
2.5.1.- Preparación de anticuerpos
2.5.1.1.- Anticuerpos contra antígenos
t o tal es
2.5.1.2.- Anticuerpos contra antígenos
pu r ¡ficados
2.5.2.- Inmunotrausferencia (“Western blotting “)
2.5.3.- Inmunoprecipitación
2.5.4.- Inmunon, icroscopla electrónica
2.6. - Aislamiento (le RNA celular total
2.7.-...