aislamiento de celulas
Páginas: 3 (699 palabras)
Publicado: 9 de mayo de 2013
AISLAMIENTO Y CULTIVO DE CELULAS PRIMARIAS DEL INTESTINO DE RATA
INTRODUCCION:
Células epiteliales del intestino delgado (CEID) han sido difíciles de mantener en cultivo, permaneciendoviable por sólo horas a varios días. Aunque cultivos por mucho mas tiempo de CEI derivado de ratas han dependido de su inmortalización por transfeccion con el virus 40 de simio para que siga siendoviable. Cultivo con éxito CEID depende de muchos factores tales como el método de la digestión y la disociación; un buen tratamiento y aplicación del suero, y tratamiento de las placas de cultivo.Intestino delgado de ratas de recién nacido (prefieren 14-16 días) o adulto produce un gran número de células (5-10 x 107), con un 30-40% de eficiencia de plaqueo.
Este protocolo se desarrolló para lafijación y el crecimiento de células epiteliales de Intestino delgado de ratas recién nacidas o adultas.
Objetivo
Aislar células epiteliales a partir de Intestino Delgado de rata.
Material yreactivos:
Tripsina 0.1% en PBS
PBS
Medio de Cultivo DMEM
Antibioticos Ampicilina /Streptomicina
Antimicoticos Anfotericina
Suero Bovino Fetal
Kit de diseccion esteril
Alcohol 70%
Placas Petripara cultivo de células
Placas “six well” para cultivo de celulas
Pipetas 10 ml esteril
Intestino de rata Hielo
Tubos de ensayo 10x15
Tubos Falcon de 15 y 50 ml.
Pipetas Pasteur
Centrifugaclínica
PROCEDIMIENTO:
Aislamiento del intestino:
1. Las ratas se sacrifican mediante narcosis por CO2 o un método que sea aprobado por la institución Universitaria o de Investigación.
2. Lavar elabdomen con alcohol 70%, luego de orear unos 5 minutos, Abrir el abdomen y localizar el intestino delgado.
3. Una vez que el intestino es aislado, las muestras de tejido debe colocarse inmediatamenteen una placa petri que contiene 5-10 ml de PBS frio, a partir de este paso se tiene 1 hora para el asilamiento de células.
4. Hacer dos lavados con 5 ml de PBS y cortar el Intestino en trozos de 1...
INTRODUCCION:
Células epiteliales del intestino delgado (CEID) han sido difíciles de mantener en cultivo, permaneciendoviable por sólo horas a varios días. Aunque cultivos por mucho mas tiempo de CEI derivado de ratas han dependido de su inmortalización por transfeccion con el virus 40 de simio para que siga siendoviable. Cultivo con éxito CEID depende de muchos factores tales como el método de la digestión y la disociación; un buen tratamiento y aplicación del suero, y tratamiento de las placas de cultivo.Intestino delgado de ratas de recién nacido (prefieren 14-16 días) o adulto produce un gran número de células (5-10 x 107), con un 30-40% de eficiencia de plaqueo.
Este protocolo se desarrolló para lafijación y el crecimiento de células epiteliales de Intestino delgado de ratas recién nacidas o adultas.
Objetivo
Aislar células epiteliales a partir de Intestino Delgado de rata.
Material yreactivos:
Tripsina 0.1% en PBS
PBS
Medio de Cultivo DMEM
Antibioticos Ampicilina /Streptomicina
Antimicoticos Anfotericina
Suero Bovino Fetal
Kit de diseccion esteril
Alcohol 70%
Placas Petripara cultivo de células
Placas “six well” para cultivo de celulas
Pipetas 10 ml esteril
Intestino de rata Hielo
Tubos de ensayo 10x15
Tubos Falcon de 15 y 50 ml.
Pipetas Pasteur
Centrifugaclínica
PROCEDIMIENTO:
Aislamiento del intestino:
1. Las ratas se sacrifican mediante narcosis por CO2 o un método que sea aprobado por la institución Universitaria o de Investigación.
2. Lavar elabdomen con alcohol 70%, luego de orear unos 5 minutos, Abrir el abdomen y localizar el intestino delgado.
3. Una vez que el intestino es aislado, las muestras de tejido debe colocarse inmediatamenteen una placa petri que contiene 5-10 ml de PBS frio, a partir de este paso se tiene 1 hora para el asilamiento de células.
4. Hacer dos lavados con 5 ml de PBS y cortar el Intestino en trozos de 1...
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