Aislamiento de nucleoproteinas y rconocimiento de adn
Páginas: 8 (1890 palabras)
Publicado: 18 de septiembre de 2012
BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA
LICENCIATURA EN QUIMICO FARMACOBIOLOGO
FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS
MATERIA:
LABORATORIO DE BIOQUIMICA II
PRACTICA 6:
AISLAMIENTO DE NUCLEOPROTEÍNAS Y RECONOCIMIENTO DE DNA
ALUMNAS:
CONTRERAS LIZBETH
REMIGIO ALVARADO NAYELI
SILVA VIRGEN YOMALY ISABEL
PROFESORA: M.C. LETICIA GARCIA ALBARRAN
AISLAMIENTO DE NUCLEOPROTEÍNAS YRECONOCIMIENTO DE DNA
El ácido ribonucleico (ARN) y el ácido desoxirribonucleico (ADN) son macromoléculas que intervienen en el almacenamiento y la transferencia de la información genética, son componentes fundamentales de la célula y constituyen entre el 5 y 10% del proceso. Normalmente no se encuentran solos si no que se encuentran formando nucleoproteínas, ya que suelen unirse a determinadostipos de estas como las histonas.
Bases pirimidínicas
El ARN se localiza tanto en el citoplasma celular como en el núcleo, mitocondrias y cloroplastos, mientras que el ADN se sitúa fundamentalmente en el núcleo de la célula y también en cloroplastos mitocondrias en pequeñas cantidades. Los grupos fosfato secundarios que se repiten en el DNA y constituyen los puentes entre nucleótidosadyacentes, tienen un pK bastante bajo y se ionizan por completo a pH bastante superior a 4. El DNA es el almacén de la información genética, mientras que el RNA es el que interviene en la expresión de esa información.
El ADN se desnaturaliza fácilmente y debe trabajarse con cuidado para obtener un producto estructuralmente semejante al encontrado en la célula. Debe eliminarse la tensión mecánica ycondiciones físicas y químicas extremas y deben inhibirse las nucleasas. Se puede agregar citrato de sodio para ligar Ca++ y Mg++ los cuales son cofactores de las DNasa. Las nucleoproteínas son solubles en agua y soluciones de alta concentración iónica, pero son insolubles en soluciones de baja concentración iónica (0.05- 0.25 mol/L) esta propiedad es usada en su extracción.
Las nucleoproteínasde DNA son solubles en soluciones salinas concentradas, pero son insolubles en soluciones salinas diluidas.
Una fuente importante de nucleoproteínas son los tejidos ricos en núcleos (leucocitos, espermatozoides, células hepáticas, etc.). En soluciones salinas concentradas las desoxirribonucleoproteínas forman disoluciones muy viscosas y se solubilizan en soluciones salinas diluidas.
Al serprecipitadas, las nucleoproteínas se sedimentan en forma de hilos. Una de las técnicas empleadas para diferenciar nucleoproteínas de DNA de las nucleoproteínas de RNA es la reacción con difenilamina, que frente a las nucleoproteínas de DNA da una coloración azul a diferencia del color verde que da frente a las nucleoproteínas de RNA.
Se ha empleado frecuentemente la reacción de difenilamina deDische, esta depende de la formación de color azul al calentar DNA con difenilamina en disolución acida. La presencia de azúcar reducido se detecta más en los nucleótidos de purina que en los de piridina. Para incrementar la sensibilidad de la reacción y reducir la interferencia de otros compuestos se añade acetaldehído y se deja que la reacción se lleve a cabo a 100°C la reacción transcurradurante varias horas a 30°C.
En presencia de NaCl 1M la polilisina interacciona específicamente con el DNBA rico en A + T pudiendo precipitarlo de una mezcla con DNA rico en G+C. por otra parte la poliarginina interacciona preferentemente con el DNA rico en G+C.
La concentración de ADN en la muestra se puede estimar con la reacción de la difenilamina. Este colorante reacciona selectivamente con2-desoxipentosas. En disolución ácida la desoxipentosa se convierte en el altamente reactivo β-hidroxilevulínaldehídoque reacciona con la difenilamina para dar un compuesto azul. Una curva patrón de concentraciones conocidas de DNA nos permitirá determinar el contenido en DNA del problema por interpolación sobre la recta patrón de las densidades ópticas de la disolución problema.
En este tipo...
LICENCIATURA EN QUIMICO FARMACOBIOLOGO
FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS
MATERIA:
LABORATORIO DE BIOQUIMICA II
PRACTICA 6:
AISLAMIENTO DE NUCLEOPROTEÍNAS Y RECONOCIMIENTO DE DNA
ALUMNAS:
CONTRERAS LIZBETH
REMIGIO ALVARADO NAYELI
SILVA VIRGEN YOMALY ISABEL
PROFESORA: M.C. LETICIA GARCIA ALBARRAN
AISLAMIENTO DE NUCLEOPROTEÍNAS YRECONOCIMIENTO DE DNA
El ácido ribonucleico (ARN) y el ácido desoxirribonucleico (ADN) son macromoléculas que intervienen en el almacenamiento y la transferencia de la información genética, son componentes fundamentales de la célula y constituyen entre el 5 y 10% del proceso. Normalmente no se encuentran solos si no que se encuentran formando nucleoproteínas, ya que suelen unirse a determinadostipos de estas como las histonas.
Bases pirimidínicas
El ARN se localiza tanto en el citoplasma celular como en el núcleo, mitocondrias y cloroplastos, mientras que el ADN se sitúa fundamentalmente en el núcleo de la célula y también en cloroplastos mitocondrias en pequeñas cantidades. Los grupos fosfato secundarios que se repiten en el DNA y constituyen los puentes entre nucleótidosadyacentes, tienen un pK bastante bajo y se ionizan por completo a pH bastante superior a 4. El DNA es el almacén de la información genética, mientras que el RNA es el que interviene en la expresión de esa información.
El ADN se desnaturaliza fácilmente y debe trabajarse con cuidado para obtener un producto estructuralmente semejante al encontrado en la célula. Debe eliminarse la tensión mecánica ycondiciones físicas y químicas extremas y deben inhibirse las nucleasas. Se puede agregar citrato de sodio para ligar Ca++ y Mg++ los cuales son cofactores de las DNasa. Las nucleoproteínas son solubles en agua y soluciones de alta concentración iónica, pero son insolubles en soluciones de baja concentración iónica (0.05- 0.25 mol/L) esta propiedad es usada en su extracción.
Las nucleoproteínasde DNA son solubles en soluciones salinas concentradas, pero son insolubles en soluciones salinas diluidas.
Una fuente importante de nucleoproteínas son los tejidos ricos en núcleos (leucocitos, espermatozoides, células hepáticas, etc.). En soluciones salinas concentradas las desoxirribonucleoproteínas forman disoluciones muy viscosas y se solubilizan en soluciones salinas diluidas.
Al serprecipitadas, las nucleoproteínas se sedimentan en forma de hilos. Una de las técnicas empleadas para diferenciar nucleoproteínas de DNA de las nucleoproteínas de RNA es la reacción con difenilamina, que frente a las nucleoproteínas de DNA da una coloración azul a diferencia del color verde que da frente a las nucleoproteínas de RNA.
Se ha empleado frecuentemente la reacción de difenilamina deDische, esta depende de la formación de color azul al calentar DNA con difenilamina en disolución acida. La presencia de azúcar reducido se detecta más en los nucleótidos de purina que en los de piridina. Para incrementar la sensibilidad de la reacción y reducir la interferencia de otros compuestos se añade acetaldehído y se deja que la reacción se lleve a cabo a 100°C la reacción transcurradurante varias horas a 30°C.
En presencia de NaCl 1M la polilisina interacciona específicamente con el DNBA rico en A + T pudiendo precipitarlo de una mezcla con DNA rico en G+C. por otra parte la poliarginina interacciona preferentemente con el DNA rico en G+C.
La concentración de ADN en la muestra se puede estimar con la reacción de la difenilamina. Este colorante reacciona selectivamente con2-desoxipentosas. En disolución ácida la desoxipentosa se convierte en el altamente reactivo β-hidroxilevulínaldehídoque reacciona con la difenilamina para dar un compuesto azul. Una curva patrón de concentraciones conocidas de DNA nos permitirá determinar el contenido en DNA del problema por interpolación sobre la recta patrón de las densidades ópticas de la disolución problema.
En este tipo...
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