Aislamiento Viral

AISLAMIENTO VIRAL
Los virus pueden multiplicarse solamente en células vivas y existe cierta especificidad para que un virus penetre a la célula huésped y multiplique. Esta especificidad de unión depende tanto de las propiedades de la cubierta del virión como de receptores específicos en la superficie celular y de la existencia de factores celulares necesarios para la replicación.
Cuando seiniciaron los estudios experimentales y se desarrollaron los primeros métodos de diagnóstico de infecciones virales, debido a que no siempre era posible utilizar el huésped natural (hombre, animales, etc.) se recurrió a los animales de laboratorio (pequeños roedores) y huevos embrionados para multiplicar los virus. Tiempo después aparecieron los cultivos celulares.
La multiplicación de un virus en unhospedador experimental suele presentar problemas de adaptación que se solucionan efectuando una serie de pasajes sucesivos denominados "pasajes ciegos", hasta que aparezcan los síntomas o lesiones características. El cultivo de células es una de las técnicas básicas del laboratorio de Virología. Constituye el elemento fundamental para la multiplicación viral in vitro, ya que ofrece células vivasrodeadas de un medio inanimado que provee el máximo de condiciones favorables para lograr la infección y multiplicación viral. La adaptación de un sistema celular a un medio que permita su crecimiento y mantenimiento ofrece muchas ventajas para estudiar la interacción virus-célula, como por ejemplo:
1- Acceso directo del virus a la célula huésped
2- Comportamiento previsible para la infeccióncon determinados virus y puede
mantenerse con relativa facilidad en el laboratorio.
3- Permiten el estudio de alteraciones metabólicas o citopatogénicas
4- Están libres de interferencias tales como anticuerpos, hormonas, etc.
Las condiciones óptimas de cultivo varían con los diferentes tipos de células, lo cual exige el conocimiento del sistema para asegurar buenos resultados. Son muchas lasvariables a tener en cuenta y cada una de ellas merece particular atención según el tipo de cultivo que se realice y las células con que se trabaje: monocapa estática, monocapa en sistema roller, cultivos en suspensión, cultivos de alta densidad (microcarriers). Los factores más importantes son:
1) Temperatura
2) Composición del medio de cultivo
3) pH
4) Concentración de gases disueltos
5)Características del soporte inerte en el cual se propaga el
cultivo
6) Otros factores específicos.

TIPOS DE CULTIVOS CELULARES SEGÚN SU CONSTITUCIÓN CELULAR
Primario: Es el primer cultivo de células a partir de un tejido (embrión de pollo, membrana corioalantoidea, dermis, riñon, pulmón, tumores). Constituye una población mixta de células obtenida a partir de la dispersión del tejidooriginal por acción digestora de una enzima (tripsina) asociada a una sustancia quelante (Acido Etilene Diamino Tetra-acético (EDTA)).
Secundarios: Son los subcultivos del cultivo primario. En la mayoría de los casos solo son posibles un número limitado de subcultivos. Estas células deben subcultivarse con un conteo inicial relativamente alto.
Línea celular: Es una poblaciónuniforme de células, con un índice de multiplicación adecuado, derivadas de un cultivo celular primario que ha sido subcultivado durante un gran número de subpasajes (generalmente mas de 50 pasajes). La uniformidad celular se puede lograr por la selección espontánea de una subpoblación celular a lo largo de los pasajes o por clonación múltiple.
La 'American Type Culture Collection"(ATCC), un banco de células de los Estados Unidos, ha editado publicaciones donde se describen las características de una amplia variedad de líneas celulares, su disponibilidad para diversos fines y, donde se proveen instrucciones para la preparación, congelamiento y almacenamiento de las mismas ("Catálogo de líneas celulares e hibridomas de ATCC")
Actualmente la ATCC posee líneas celulares de...