ALTA FRECUENCIA DE REGENERACION DE BROTES EN Agave sisalana
Páginas: 6 (1263 palabras)
Publicado: 13 de enero de 2015
ALTA FRECUENCIA DE REGENERACION DE BROTES EN Agave sisalana
INTRODUCCIÓN
Agave sisalana (Agavaceae) un xerophyte perenne, produce una fibra dura de valor comercial. Tradicionalmente, la fibra se utiliza para cables y cuerdas, pero también se puede despulpar y ser utilizado en la industria papelera. La planta también se puede utilizar para la reforestación de las tierras áridas, ya que crecebien en suelo seco y arenoso.
El presente trabajo reporta el establecimiento de cultivo de callos en Agave sisalana y la evaluación de medios basales, así como los requisitos necesarios de reguladores de crecimiento para maximizar y sostener el crecimiento continuo de callos y regeneración de alta frecuencia de los brotes.
METODOLOGÍA
Explantes madre fueron aislados de bulbillos de 10 a 24 díasde vida. Al mismo tiempo, explantes de rizomas de 30 cm de largo con 2 meses de crecimiento, fueron extirpados de su crecimiento natural en Agave sisalana.
Todos los explantes fueron esterilizados superficialmente con 5 mL de Dettol en 95 mL de agua destilada estéril de 8 a 10 min, seguidos de una inmersión en al 0.1 % por 6-8 min. Después de enjuagar los explantes siete veces en aguadestilada, los cortes superficiales de los explantes fueron cortados y desechados. Luego los explantes se cultivaron en medio MS, Gamborg, SH y White suplementados con vitaminas MS y con IAA, NAA, 2,4 D-kinetina D y BA (0.1 a 5.0 mgL - 1) ya sea individualmente o en combinaciones.
EL pH de cada medio fue ajustado a 5.7 con NaOH 1N y se añadió 8 g/L de agar antes deesterilizarlos por 20 minutos a 121°C y 108 kPa.
El rizoma y los callos madre se mantuvieron en medio MS adicionado con 1.5 mg/L de BA, y 0.5 mg/L de NAA. Por otro lado 25 mg de los callos fueron subcultivados en medio fresco a intervalos de 30 dias. Los callos de rizomas y explantes madre fueron probados por rizogénesis y potencial de regeneración de brotes en medio MS adicionado con 0.5 mg/L deNAA y 0.5 mg/L de kinetina. Se esterilizó agua de coco por filtración que fue adicionada al medio de regeneración del brote. Los cultivos se mantuvieron a 26±4 °C en luz por 10h (41.71 µmol/m2s) y por 14h en oscuridad.
RESULTADOS
Las diferencias significativas entre las medias de tratamiento se determinaron utilizando el Test de Rango Múltiple de Duncan. Los explantes de rizoma y callossuplementados con 0.1 a 2 mg/L de 2-4 D o 0.1 a 5 mg/L de BA no mostraron organogénesis. Sin embargo, en la adición de 0.2 a 2 mg/L de kinetina al medio MS indujó la formación de brotes en menos de 3 a 4 semanas. El mayor número de brotes regenerados directamente en explantes del rizoma (5 ± 1.3 brotes por cultivo) y explantes de callo (5.7 ± 1.97) se observaron a 0.5 mg/L de kinetina.
Se obtuvieronbrotes de explantes de callos y rizomas. La capacidad para la regeneración de brotes se mantuvo constante en el callo durante más de 32 meses. Los brotes regenerados arraigan fácilmente dentro de 21-35 días en la arena fina; con la mitad de sales inorgánicas del medio MS.
Alcanzados una altura aproximadamente 1 cm dentro de 5 semanas; se encontró que el callo era más regenerativo (27.57 ± 7.79 brotespor la cultivo) que el callo rizoma (14 ± 3.6 brotes por la cultivo).
DISCUSIÓN
Binh et al. ( 1990 ) reportaron que la regeneración óptima (de 4 a 5 brotes por cultivo) en A. cantala, A. fourcroydes y A. sisalana se observó en medio MS suplementado con 10 % de agua de coco, 0.075 mg/L de NAA , 0.1 mg/L de IBA y 0.5 mg/L de kinetina. En la presente investigación lasconcentraciones de agua de coco (de 1 a 20%) y el IAA o NAA ( 0.05 a 1 mg/L ) no ayudaron disparar a la regeneración. Según Das ( 1992 ) BA (2.2 a 44 µM) en medio SH inducido mostró de 8-12 brotes en el tercer paso en explantes de rizomas de A. sisalana. se encontró que el BA era ineficaz en la inducción de la regeneración de brotes múltiples en A. cantala , A. fourcroydes , A. sisalana ( Binh...
INTRODUCCIÓN
Agave sisalana (Agavaceae) un xerophyte perenne, produce una fibra dura de valor comercial. Tradicionalmente, la fibra se utiliza para cables y cuerdas, pero también se puede despulpar y ser utilizado en la industria papelera. La planta también se puede utilizar para la reforestación de las tierras áridas, ya que crecebien en suelo seco y arenoso.
El presente trabajo reporta el establecimiento de cultivo de callos en Agave sisalana y la evaluación de medios basales, así como los requisitos necesarios de reguladores de crecimiento para maximizar y sostener el crecimiento continuo de callos y regeneración de alta frecuencia de los brotes.
METODOLOGÍA
Explantes madre fueron aislados de bulbillos de 10 a 24 díasde vida. Al mismo tiempo, explantes de rizomas de 30 cm de largo con 2 meses de crecimiento, fueron extirpados de su crecimiento natural en Agave sisalana.
Todos los explantes fueron esterilizados superficialmente con 5 mL de Dettol en 95 mL de agua destilada estéril de 8 a 10 min, seguidos de una inmersión en al 0.1 % por 6-8 min. Después de enjuagar los explantes siete veces en aguadestilada, los cortes superficiales de los explantes fueron cortados y desechados. Luego los explantes se cultivaron en medio MS, Gamborg, SH y White suplementados con vitaminas MS y con IAA, NAA, 2,4 D-kinetina D y BA (0.1 a 5.0 mgL - 1) ya sea individualmente o en combinaciones.
EL pH de cada medio fue ajustado a 5.7 con NaOH 1N y se añadió 8 g/L de agar antes deesterilizarlos por 20 minutos a 121°C y 108 kPa.
El rizoma y los callos madre se mantuvieron en medio MS adicionado con 1.5 mg/L de BA, y 0.5 mg/L de NAA. Por otro lado 25 mg de los callos fueron subcultivados en medio fresco a intervalos de 30 dias. Los callos de rizomas y explantes madre fueron probados por rizogénesis y potencial de regeneración de brotes en medio MS adicionado con 0.5 mg/L deNAA y 0.5 mg/L de kinetina. Se esterilizó agua de coco por filtración que fue adicionada al medio de regeneración del brote. Los cultivos se mantuvieron a 26±4 °C en luz por 10h (41.71 µmol/m2s) y por 14h en oscuridad.
RESULTADOS
Las diferencias significativas entre las medias de tratamiento se determinaron utilizando el Test de Rango Múltiple de Duncan. Los explantes de rizoma y callossuplementados con 0.1 a 2 mg/L de 2-4 D o 0.1 a 5 mg/L de BA no mostraron organogénesis. Sin embargo, en la adición de 0.2 a 2 mg/L de kinetina al medio MS indujó la formación de brotes en menos de 3 a 4 semanas. El mayor número de brotes regenerados directamente en explantes del rizoma (5 ± 1.3 brotes por cultivo) y explantes de callo (5.7 ± 1.97) se observaron a 0.5 mg/L de kinetina.
Se obtuvieronbrotes de explantes de callos y rizomas. La capacidad para la regeneración de brotes se mantuvo constante en el callo durante más de 32 meses. Los brotes regenerados arraigan fácilmente dentro de 21-35 días en la arena fina; con la mitad de sales inorgánicas del medio MS.
Alcanzados una altura aproximadamente 1 cm dentro de 5 semanas; se encontró que el callo era más regenerativo (27.57 ± 7.79 brotespor la cultivo) que el callo rizoma (14 ± 3.6 brotes por la cultivo).
DISCUSIÓN
Binh et al. ( 1990 ) reportaron que la regeneración óptima (de 4 a 5 brotes por cultivo) en A. cantala, A. fourcroydes y A. sisalana se observó en medio MS suplementado con 10 % de agua de coco, 0.075 mg/L de NAA , 0.1 mg/L de IBA y 0.5 mg/L de kinetina. En la presente investigación lasconcentraciones de agua de coco (de 1 a 20%) y el IAA o NAA ( 0.05 a 1 mg/L ) no ayudaron disparar a la regeneración. Según Das ( 1992 ) BA (2.2 a 44 µM) en medio SH inducido mostró de 8-12 brotes en el tercer paso en explantes de rizomas de A. sisalana. se encontró que el BA era ineficaz en la inducción de la regeneración de brotes múltiples en A. cantala , A. fourcroydes , A. sisalana ( Binh...
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