analisis instrumental

ANÁLISIS INSTRUMENTAL FARMACÉUTICO
Métodos de cuantificación (I)

En el análisis instrumental en general, se utilizan varias formas de realizar el trabajo experimental y de procesar los datos y lecturas de la señal analítica que nos proporcionan los equipos empleados o la forma de calcularla, según el método instrumental de que se trate, para calcular los resultados finales de concentraciónde los analitos en las muestras objeto de investigación o control. Esas formas de trabajar y de procesar los datos se conocen como métodos de cuantificación, puesto que cada uno de ellos requiere de una metodología de trabajo diferente. El empleo de uno y otro depende de varios factores y, en todos los casos, el método instrumental deberá estar previamente validado, a través de todos los criteriosde calidad establecidos.
Métodos de cuantificación utilizados en el análisis instrumental
Una particularidad de casi todos los métodos instrumentales que pueden ser aplicados con fines cuantitativos, es la necesidad de utilizar patrones de referencia (recordar qué es un PR) del analito que se desea cuantificar porque las determinaciones instrumentales que se hagan a la muestra se comparan conla respuesta del patrón de referencia, bajo las mismas condiciones experimentales.
Por tanto, la esencia de cualquier procedimiento de cuantificación es la comparación de la señal brindada por el analito con la señal brindada por uno o varios patrones de referencia de concentración exactamente conocida.
Por otra parte, la mayoría de los procedimientos o métodos de cuantificación se fundamentanen la relación directamente proporcional que existe entre la concentración de la especie analizada y la señal analítica que se mide.
Existen tres métodos o procedimientos básicos generales que se utilizan para llevar a cabo un análisis cuantitativo cuando se emplea un método instrumental:
1) curva de calibración
2) patrón externo
3) adición de patrón

Método de la curva de calibración
Esun procedimiento analítico que se aplica en todos los métodos instrumentales en los que se ha demostrado que existe una proporcionalidad directa entre la señal analítica que se mide y la concentración de la sustancia objeto de estudio (analito). Permite la cuantificación exacta y precisa del compuesto de interés, una vez demostrada experimentalmente la linealidad del método para las condicionesde trabajo seleccionadas.
Los pasos generales para la realización de una curva de calibración son los siguientes:
1. Preparación de la disolución de ensayo (o disolución de prueba), a partir de la muestra (pesada exactamente), según la metodología requerida para garantizar la ausencia de interferencias.
2. Preparación de una disolución de concentración exacta a partir de un patrón dereferencia del analito (disolución madre o disolución patrón concentrada).
3. Preparación de una serie de disoluciones patrones, a partir de la disolución anterior, a concentraciones crecientes y exactamente conocidas, en las mismas condiciones que la muestra (disolvente, pH, temperatura, derivatización, etc). El número de disoluciones puede estar comprendido entre 5 y 10 y las concentraciones seseleccionan de acuerdo con las cantidades esperadas del analito en la muestra.
4. Medición, al menos tres veces, de la señal analítica de la disolución de ensayo y de cada una de las disoluciones de los patrones de referencia, fijando previamente las condiciones requeridas en el equipo.
5. Con los valores de señal analítica y concentración de cada disolución patrón, se confecciona una tabla como laque se muestra a continuación:
Disoluciones patrones
1
2
3
4
5
6
Concentración (unidades)
Cdp1
Cdp2
Cdp3
Cdp4
Cdp5
Cdp6
Señal analítica
SA1
SA2
SA3
SA4
SA5
SA6
6. A partir de los datos correspondientes a las disoluciones patrones se aplica una regresión lineal simple con ayuda del método de los mínimos cuadrados para obtener la ecuación de regresión:
y = mx + b
donde:
y...