Analisis Microbiologico Del Suelo

LABORATORIO 3
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DE SUELOS
Objetivo: Establecer los fundamentos prácticos para realizar la cuantificación de microorganismos del suelo (hongos y bacterias).
Procedimiento
1)En condiciones estériles , adicionar 11 g del suelo a una botella de dilución o matraz con tapa de rosca con 99 ml de solución salina isotónica estéril (dilución 10-2). Dispersar el suelo yhomogeneizar con agitación vigorosa.
2) Tomar 1 ml y transferirlo a un tubo con 9 ml de solución salina estéril (dilución 10-3). De ahí se hacen diluciones sucesivas hasta completar diluciones decimales hasta10-7 o las adecuadas, asegurándose de utilizar una punta o pipeta estéril diferente en cada paso. Agitar de forma constante con en cada paso.
3) Tomar 0.1 ml de la dilución seleccionada y colocarlaen el centro de la superficie del medio de cultivo seleccionado para el crecimiento. Realizar esto con tres diluciones próximas.
4) Extender la alícuota en la superficie de la placa con una varillade vidrio previamente esterilizada (inmersa en alcohol y pasándola por la flama del mechero permitiendo su enfriamiento). Asegurar una distribución homogénea por toda la superficie del medio.
5)Incubar las placas de forma invertida a 30ºC en ausencia de luz.
6) Después de un periodo de incubación de 24 a 48 horas, contar el número de colonias y reportar como unidades formadoras de colonias(UFC)/ g de suelo seco.
Cálculos
1) Contar sólo aquellas cajas (diluciones) que contengan de 30 a 300 colonias.
2) Con la siguiente ecuación calcular las UFC/g s.s.
UFC/g s.s. = (NC * 1/FD * 1/ V) /(P * FH).
Donde:
UFC/ g s. s. = unidades formadoras de colonias / g de suelo seco.
NC= número de colonias en una caja.
FD = factor de dilución que corresponde a la dilución de donde se tomó lamuestra con la que se inocula la caja.
V= volumen inoculado en la caja = 0.1 ml.
P = peso de la muestra húmeda = 11 g.
FH = factor de corrección de humedad (1-(%humedad/100)). En nuestro caso...