antibiograma

Cortesía de la Bióloga L. C.

El antibiograma
FUNDAMENTOS: Se entiende por antibiograma el estudio de la sensibilidad "in vitro"
de las bacterias a los antibióticos. Por extensión, se suele incluir el estudio de la
sensibilidad a las sulfamidas y otros quimioterápicos. La razón por la cual es
conveniente el estudio del antibiograma de una bacteria determinada radica en el
hecho de ladiferente sensibilidad a los antibióticos de las distintas especies
bacterianas y, más aún, en el hecho de que en numerosas especies existen grandes
diferencias de sensibilidad a un determinado antibiótico entre unas y otras cepas.
El antibiograma es un método de diagnóstico rápido y preciso Con ayuda del
antibiograma se puede escoger el antibiótico más adecuado para el tratamiento de
unaenfermedad.
MATERIAL:
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Agar de Mueller-Hinton (Composición en gramos por litro de agua destilada: infusión de
carne, 300 g; peptona ácida de caseína, 170.5 g; almidón, 1.5 g; agar, 15 g; pH=7.3±0.2).
Antibiótico (Penicilina o cualquier otro que pueden traer los alumnos).
Hisopo o bastoncillo de algodón.
Tijeras
Papel de filtro
Placas de Petri
Tubos de ensayo.

MONTAJE: Elantibiograma que se va a realizar, sigue la técnica basada en las
experiencias de Kirby-Bauer (Bauer et al., 1960). Según estos autores, el
microorganismo deberá inocularse en la superficie de una placa de agar, sobre la cual
se colocarán discos impregnados con una concentración conocida de antibiótico. Las
placas se incubarán durante 15 horas a 35 ºC. Durante la incubación, el antibióticodifundirá radialmente desde el disco a través del agar de cultivo, por lo que su
concentración irá disminuyendo a medida que se aleja del disco.
Primeramente se siembra en superficie de los microorganismos aislados previamente
de las manos de los alumnos. Es preferible, aislar microorganismos Grampositivos,
seleccionándose las colonias de coloración amarilla (Micrococcus luteus) o blanca(Bacillus sp).
Tras el cultivo de los microorganismos, la práctica comienza en el laboratorio con la
preparación del antibiótico y la posterior dilución.
Se harán diluciones serán de 10-3, 10-4 y 10-5 del stock de antibiótico. A continuación, y
mediante el uso de un hisopo o bastoncillo de algodón, se tomará una colonia
microbiana y se dispersará sobre la superficie de una placa de cultivo.

1Los alumnos, con ayuda de unas tijeras limpias, cortarán una superficie de papel de
filtro de 0.5 cm × 0.5 cm, aproximadamente, cogiendo los trozos resultantes con la
ayuda de unas pinzas y se dispondrán sobre la placa de cultivo, en la que previamente
se había inoculado la bacteria, organizando una hipotética estructura triangular,
disponiéndolos en los vértices.

A continuación sedispondrá una gota de la solución de antibiótico 10 -5 en uno de los
discos.

Del mismo modo, se dispensará una gota de la dilución 10 -4 y 10-3 en los dos discos
restantes.

La incubación se llevará a cabo a temperatura ambiente durante 48 horas, transcurrido
el período de incubación se pondrá de manifiesto la presencia de halos de inhibición
del crecimiento microbiano.
EXPLICACIÓN:
En líneasgenerales y en función sobre su forma de actuar sobre los microorganismos,
hablamos de dos grandes grupos de antibióticos Antibióticos primariamente

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bactericidas: Ejercen una acción letal e irreversible sobre el microbio (Fosfomicina
Vancomicina. B-Lactámicos Polimixina. Aminoglucósidos Rifampicina. Acido Nalidíxico
Quinoleinas. Nitrofurantoinas) Antibióticos primariamentebacteriostáticos: Inhiben el
crecimiento pero no matan al microorganismo, permitiendo que las propias defensas
del huésped pueden eliminar a las bacterias (Tetraciclina Cloranfenicol. Sulfonamidas
Trimetroprim. Lincomicina Clindamicina. Macrólidos). Las formas de actuar de los
antibióticos son muy diversas:
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Inhiben la síntesis de la pared celular bacteriana.
Inhiben la síntesis de...