Aplicacion De La Biologia Molecular Al Diagnostico Y Tipificacion De Bacterias Y Hongos Patógenos

APLICACION DE LA BIOLOGIA MOLECULAR AL DIAGNOSTICO Y TIPIFICACION DE BACTERIAS Y HONGOS PATÓGENOS Tatiana Erazo, Marinés Giraldo C. & Cesar Giraldo Abril 5 del 2005

RESUMEN
Las técnicas de biología molecular se dividen según su alcance en las de diagnóstico y las de tipificación. Como pruebas de diagnóstico se encuentran: 1. La PCR, mediante la cual se amplifica el DNA microbiano objetivo yse comprueba su amplificación con un southern-blot. Es útil para el diagnostico del bacilo de la tuberculosis y candida albicans; 2. Hibridización de ácidos nucleicos, como una prueba rápida que consiste en la aplicación de sondas marcadas que hibridizen con el genoma del microorganismo sospechoso; 3. El uso de antígenos microbianos, que con un prueba de Elisa utiliza antígenos y detectaanticuerpos y se confirma con Western-blot y, 4. El mapeo de epitopos que se basa en la reacción de una proteína sintética que representa un epitopo lineal con determinadas anticuerpos. Entre las técnicas de tipificación las más empleadas son: 1. El análisis de perfiles plasmidicos, para determinar las relaciones epidemiológicas entre plásmidos de bacterias y, 2. El análisis por macrorrestrincción, como unatécnica que mediante el uso de enzimas de baja frecuencia de corte genera polimorfismos que se estudian mediante una PFGE y que permite determinar la relación entre aislamientos. En conclusión, las técnicas de la biología molecular ha tenido un impacto positivo en el entendimiento de la inmunología y la patogenicidad y en la microbiología clínica con nuevas alternativas de diagnostico ytipificación.

INTRODUCCIÓN El estudio epidemiológico molecular de las enfermedades infecciosas tiene por objeto determinar la relación clonal que existe entre varios aislados de una misma especie. El término clon o grupo clonal en epidemiología hace referencia al grupo de aislamientos relacionados por el hecho de descender de un ancestro común, esto es, por formar parte de una cadena de replicación ytransmisión. Las cepas relacionadas provienen, pues, de la expansión clonal de un precursor único y poseen un nivel de similitud entre sus genotipos y fenotipos significativamente superior al que se encontraría entre aislamientos no relacionados de la misma especie seleccionados arbitrariamente Esta información es muy útil, sobre todo cuando se producen brotes epidémicos causados por cepasmultirresistentes, porque permite determinar el número de clones circulantes, identificar la fuente de contaminación o reservorio y los vehículos de transmisión y evaluar la eficacia de las medidas de control dirigidas a evitar la diseminación. Los métodos de tipificación se clasifican en dos grandes grupos: fenotípicos (basados en características fisiológicas o bioquímicas) y genotípicos (basados en elestudio del ADN). Los métodos fenotípicos de tipificación son menos reproducibles y poseen menor poder de discriminación que los métodos genotípicos. Ello se debe a que la expresión de un carácter fenotípico es el resultado de la interacción del genotipo con el ambiente y, por tanto, es susceptible de modificarse cuando las condiciones ambientales varían. El extraordinario avance de la biologíamolecular en los últimos años ha permitido desarrollar nuevos métodos genotípicos de tipificación. La electroforesis en gel de campo pulsante (PFGE) es la técnica estándar de referencia para tipificar la mayoría de bacterias, hongos y parásitos con importancia clínica, debido a que posee un elevado poder de discriminación y una excelente reproducibilidad. Esta técnica de

tipificación tiene elinconveniente de que es muy laboriosa y duradera (la mayoría de los protocolos de trabajos requieren más de 4 días para poder obtener y analizar los pulsotipos), por lo que su uso diario en el laboratorio es poco práctico. Esto hace que sea necesaria la búsqueda de otros métodos de tipificación alternativos a la PFGE que sean más flexibles y rápidos, y menos laboriosos. La biología molecular ha...