Aportadores ADN

1. Friedrich Miescher: Separó leucocitos del material de vendajes y del suero de sangre. Solo cuando lavó dichos vendajes con una solución diluida de sulfato de sodio, aisló con éxito distintos leucocitos. Una vez aislados, tuvo que separar el núcleo del citoplasma de la mayoría de las células del “protoplasma”. El residuo de este tratamiento consistió en partes de núcleo aislado y de núcleocon pequeños fragmentos del citoplasma. El núcleo limpio, sin citoplasma contaminado, se retuvo en una fase acuosa. Miescher filtró estos núcleos y los examinó bajo microscopio. Notó que, de este modo, podía obtener “núcleos completamente puros”. Subsiguientemente extrajo los núcleos aislados con soluciones alcalinas. Luego aisló una “solución amarillenta de una sustancia” de esos núcleos. Aunqueeste protocolo permitió a Miescher aislar, por primera vez, nucleína de pureza y cantidades apreciables, era muy poca y no tan pura para sus análisis. Una de sus preocupaciones fue deshacerse de proteínas contaminantes, las cuales hubieran sesgado sus análisis. Mieschar utilizó pepsina para separar el ADN de proteínas de las células del citoplasma. Luego extrajo la pepsina para sus experimentos deestómagos de cerdos. Primero lavó las células de pus (leucocitos) para remover lípidos. Luego dejó el residuo material digerir con la solución de pepsina, separando un fino polvo gris de núcleos aislados de un “líquido amarillento”. Miescher continuó su digestión, y luego precipitó núcleos sin citoplasma adherido. Luego filtró los núcleos y los lavó con agua, hasta que no quedaran rastros deproteínas. Lavó nuevamente los núcleos y notó que la “masa nucléica”, lavada de esta manera, exhibía las mismas propiedades químicas de un núcleo aislado con ácido clorhídrico; subsiguientemente extrajo núcleos aislados.

2. Frederick Griffith: Tuvo lugar mientras investigaba una vacuna para prevenir la neumonía durante la pandemia de gripe que tuvo lugar tras la Primera Guerra Mundial. Usó dos cepasde la bacteria Streptococcus pneumoniae. La cepa S contenía una cápsula de polisacáridos y era virulenta al ser inyectada, causando neumonía y matando a las cobayas en un día o dos. Esta cápsula permitía a la bacteria resistir los ataques del sistema inmune. La cepa R no era virulenta, y no causaba neumonía, porque carecía de cápsula. Cuando la cepa S (virulenta) se calentaba para matarla, y seinyectaba en ratones, tampoco producía efectos adversos. Sin embargo, cuando se inyectaban bacterias muertas de la cepa S mezcladas con bacterias vivas de la cepa R, los ratones infectados (R/S) morían. Tras aislar la bacteria en la sangre de los ratones R/S, Griffith descubrió que la cepa R, anteriormente avirulenta, había adquirido cápsulas: las bacterias en la sangre de los ratones R/S eran todasde la cepa S, y mantenían su fenotipo a través de muchas generaciones. Griffith hipotetizó entonces la existencia de algún tipo de "principio de transformación" de las bacterias muertas de la cepa S, que hacía que las bacterias de la cepa R se transformarán también en S.

3. Oswald Avery, Colin McLeod y Maclyn McCarty: Trataron de identificar el factor de transformación (FT), que debíaencontrarse en los neumococos S muertos por el calor. Trataron los neumococos S muertos por calentamiento con detergente para obtener un lisado celular (un extracto libre de células que contenía el FT). Este lisado contiene (entre otras cosas) el polisacárido de la superficie celular, las proteínas, el ARN y el ADN de los neumococos S. Sometieron al lisado a diversos tratamientos enzimáticos. Inyectaron enratones los neumococos de tipo R vivos junto con una fracción del lisado modificada enzimáticamente. Se realizaron pruebas añadiendo enzimas para degradar factores como polisacáridos, ácidos nucléicos, RNA y ADN. Dichos experimentos concluyeron que el ADN era el factor de transformación, ya que fue la única prueba en donde al añadir la enzima el ratón sobrevivía. Esta serie de experimentos...