Art 1

Polilisina y CVIM Secuencias de K-RasB Dictar Especificidad de Prenylation y confieren resistencia a las benzodiazepinas peptidomimético in Vitro (*)
De Guy L. James (§), Joseph L. Goldstein y Michael S. Brown

Resumen
BZA-5B, un peptidomimético de benzodiazepina, inhibe C AAX farnesiltransferasa (FTasa) y bloquea la unión de grupos farnesil de tipo salvaje oncogénico y H-Ras en célulasanimales. Este compuesto se ralentiza el crecimiento de células transformadas con H-Ras oncogénico en concentraciones que no afectan el crecimiento de células no transformadas. Este hallazgo sugiere que las células no transformadas pueden producir una forma de Ras prenylation cuya es resistente a BZA-5B. En los estudios actuales, se encontró que tenía una FTasa 50 veces mayor afinidad por K-RasB quepara H-Ras in vitro. La farnesilación de K-RasB fue inhibida por BZA-2B, la forma activa de BZA-5B, pero sólo a concentraciones que eran 8 veces más altos que los que inhiben la farnesilación de H-Ras. K-RasB, pero no H-Ras, fue también un sustrato para C AAX geranil geranil-1 (GGTasa-1), y su afinidad por la enzima era igual a la de Rap1b, un sustrato leucina terminado en auténtico paraGGTasa-1. La inhibición de la geranilgeranilación de K-RasB se produjo sólo a altas concentraciones de BZA-2B. Todas estas propiedades de K-RasB fueron rastreadas a los efectos combinados de su secuencia CVIM COOH-terminal y la secuencia de polilisina adyacente, ninguno de los cuales está presente en H-Ras. Estos estudios proporcionan una posible explicación para la resistencia de las células notransformadas a inhibición del crecimiento por BZA-5B. Puesto que la mayoría de los cánceres humanos relacionados con Ras contiene versiones oncogénicas de K-RasB en lugar de H-Ras, los datos actuales sugieren que in vitro estudios de inhibidores FTasa con potencial actividad anti-cáncer deben utilizar auténtica K-RasB como sustrato.

INTRODUCCIÓN
Proteínas Ras son centrales para el proceso por el cual losagentes tales como el factor de crecimiento epidérmico y factor de crecimiento derivado de plaquetas estimulan el crecimiento de las células animales (revisado en refs. 1-3). Actuando a través de receptores tirosina quinasa, estos agentes desencadenan una vía que hace que las proteínas Ras intercambiar GTP por GDP. En la forma unida a GTP, proteínas Ras inician una cascada proteína quinasa queactiva la transcripción de genes de crecimiento de control. Proteínas Ras vuelven al estado de reposo por hidrólisis del GTP unido al PIB. Las proteínas mutantes Ras que carecen de actividad GTPasa transformar células a un fenotipo maligno, proporcionando una señal de crecimiento ininterrumpido. Tales mutaciones se encuentran comúnmente en los cánceres de páncreas y colon en humanos.
La actividad delas proteínas normales y Ras oncogénico requiere su adhesión a la valva interna de la membrana plasmática. Este proceso se inicia por la unión covalente de un grupo farnesilo hidrófobo para una cisteína en la cuarta posición desde el extremo COOH de la proteína Ras. La mutación de esta cisteína a una serina impide farnesilación, abroga unión a la membrana, y suprime la capacidad transformadorade las proteínas Ras oncogénicos (4, 5).
La farnesilación de las proteínas Ras es catalizada por una enzima heterodimérica, C AAX farnesiltransferasa (FTasa), (1) que se purificó y clonó a partir de cerebro de rata primero (, 6) y posteriormente se purificó a partir de cerebro bovino (7). Este Zn enzima cataliza la -Con un contenido de Mg de transferencia dependiente de un grupo farnesilo desdepirofosfato de farnesilo (FPP) a las proteínas Ras y varias otras proteínas, incluyendo laminas nucleares (8).
C AAX FTasa es una de dos enzimas que se unen a isoprenos cisteínas en la cuarta posición desde el extremo COOH de las proteínas (9, 10). La segunda enzima, CAAX geranilgeranilo transferasa, también se conoce como geranilgeranilo transferasa-1 (GGTasa-1). Esta enzima transfiere un grupo...