ARTICULO 3 BIOTECNO

ngeniería resistencia contra Tomato yellow leaf curl virus (TYLCV) utilizando ARN antisentido
Mohammed Bendahmane1 y Bruno Gronenborn? Instituto de Ciencias V'eg'etales, Centro Nacional de la Investigación Cientí fi Que, 91198 Gif-sur-Yvette, Francia (autor para la correspondencia?); Dirección 1Present: El Instituto de Investigación Scripps, Departamento de Biología Celular, Biología Vegetal -BCC206, 10550 Norte Torrey Pines Road, La Jolla, CA 92037, EE.UU.
Recibido el 3 de julio de 1995; aceptado en forma revisada 26 de agosto 1996
Palabras clave: geminivirus, ARN antisentido, tomate (amarillo) de la hoja de la enfermedad rizo, patógeno-derivedresistance, supresión de la replicación
abstracto
Oneofthemostseverediseasesofcultivatedtomatoworldwideiscausedbytomatoyellowleafcurlvirus(TYLCV), un geminivirus transmitido por la mosca blanca Bemisia tabaci. Aquí se describe la aplicación de ARN antisentido para interferir con la enfermedad causada por TYLCV. El objetivo de la ARN antisentido es el ARN mensajero raro de la proteína Rep, codificada por el gen C1. Se obtuvieron plantas transgénicas de Nicotiana benthamiana que expresan C1 ARN antisentido y muestran a resistir lainfección por el virus de la cuchara. Algunas de las líneas resistentes son asintomáticas, y la replicación del virus de la cuchara reto casi totalmente suprimida. Los transgenes que median la resistencia, se mostró a ser efectiva a través de al menos dos generaciones de progenie.
ARN moleculescapable de hybridizingto un determinado ARN mensajero son un medio de fi natural y arti cial regulación de genespor silenciar la expresión de la pondinggene pondiente [16] .Targetedgeneinactivationbyinhib- itingthe translationof appliedgenetechnology ARN hasbecomea majortoolin, pertinentto tanto la terapéutica y la prevención de las enfermedades virales [ver resúmenes en 16]. El tomate (amarillo) de la hoja de la enfermedad rizo [8, 9] es una en todo el mundo y en la actualidad la difusión de amenaza paratomatoes.Itiscausedbyinfectionwiththetomato cultivaron virus (ama- rillo) enrollamiento de las hojas (TYLCVs), blancos fl y-geminivirus transmitido con una variabilidad notable genoma [27, 32 , 14, 34]. Los geminivirus son de una sola cadena de ADN patógenos de plantas con un amplio espectro de los ejércitos, y algunos causan la pérdida de cultivos sustancial [4, 5]. El ADNinivirusgenomeconsistsofoneortwocirclesofsingle- hebra de gemas, cada uno que oscila entre 2,5 y 3 kb de tamaño; para una revisión ver [30]. Sólo una única proteína geminivirus es indispensable para su replicación del ADN, la AL1- o codificadas con C1 proteína Rep [15]. Rep es una proteína tifunctional multi- cuyas actividades comprenden (1) el reconocimiento especí fi co de su origen de replicación afines
mediante launión a la secuencia de motivos en la parte izquierda de la intergenicregion (IR) [18, 19, 7, 25], (2) el ADN de secuencia específica fi c cleavageto iniciar la replicationwithin conservada nonanucleotide TAATATTAC y la reacción de transferencia nucleotidyl poli- al final de una ronda de replicación [29, 21] y (3) una actividad ATPasa indispensable poder para la replicación del ADN viral [12]. Todasestas funciones esenciales de la Rep hacen que sea un objetivo ideal para la obtención de virusresistancebysuppressingitsexpression.Thusthe rara ARNm de la proteína Rep esencial (gen C1) de TYLCV-S fue elegido como diana para el ARN antisentido. El ARNm C1 de 1,45 kb (Fig. 1A) se origina en el mapa la posición 2677 que resulta en una secuencia er plomo 63 base (Bendahmane y Gronenborn, inédito). Lasecuencia de ADN que abarca todo el gen C1 y la secuencia líder completa 50 (1524-2677 fragmento) se clonó en la orientación sentido detrás del promotor T7 del pBluescript KS + para producir pBC1S (Fig. 1B). A partir de este plásmido un fragmento XmaI-NotI, llenó-in en ambos extremos, se transfirió a pBios512? (J.Mason, Biocem, com. Pers.) LinearizedbyBamH1 y también llenó en en los extremos....