BACTERIAS METANOGENICAS

BACTERIAS METANOGENICAS (primera parte cultivo diferencial)








1. Caldo caso (para 100 ml)
AGAR NUTRITIVO
0.3gr
AGUA DESTILADA
100 ml

2. Agar nutritivo 250 ML
AGAR NUTRITIVO
7gr
AGUA DESTILADA
250 ml

¿PARA QUE USO LOS COMPONENETES?
Estos medios / caldos enunciados anteriormente incluyen diversos sustratos que son utilizados por los microorganismos metanogénicoscomo fuente de energía para su crecimiento y metabolismo, siendo estos considerados y empleados en procesos biotecnológicos para la degradación del materia orgánica, para producción de gas metano a través de estiércol (cerdo-vaca),etc.


Para la diferenciación y obtención de las bacterias Methanococcus(GRAM -) y Methanobacterium(GRAM +) tanto general como selectiva se tendrán en cuenta lascaracterísticas morfológicas ( bacilos-cocos-filamentosos), y la presencia de la capa de peptidoglucano, membrana celular y externa, etc, características que diferencian a los Gram positivos de los gram negativos, por medio tinciones y de observación microscópica




DILUCIONES
Método
En este caso estamos utilizando materia orgánica aislada del aire por medio de una botella.
Sacar 10 gr de lamateria orgánica y diluirla en 90 gr de solución salina.
En un tubo de ensayo agregar 10 ml de la mezcla anterior siendo este 10 a la cero.
En un segundo tubo de ensayo poner 9 ml de solución salina y completar a 10 ml con 1 ml de la mezcla del tubo de ensayo 10 a la cero. Siendo este 10 a la uno.
En un tercer tubo de ensayo poner 9 ml de solución salina y completar a 10 ml con 1 ml de lamezcla del tubo de ensayo 10 a la uno. Siendo este 10 a la dos.
En un cuarto tubo de ensayo poner 9 ml de solución salina y completar a 10 ml con 1 ml de la mezcla del tubo de ensayo 10 a la dos. Siendo este 10 a la tres.
Nota: no olvidar que para hacer cada dilución en cada tubo de ensayo se debe hacer con una pipeta diferente y anteriormente esterilizada.
Materiales
4 tubos de ensayo
4pipetas
1 Beaker
90 ml Solución salina
10 g Materia orgánica

CALDO CASO
Metodo
Para la preparación del calo caso se mezcló 0.3 gr de agar nutritivo en polvo en 100 ml de agua calentar hasta lograr una mezcla uniforme.
Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a una temperatura de 121°C aproximadamente.
Calentar en el mechero y dejar hasta hervir.
Tomar 90 ml de caldo caso en 10g de muestra de estiércol (materia orgánica)
Hacer dilución ( como se explicó anteriormente)
De la dilución 10° sacar 1 ml y elaborar siembra de la muestra.
Seguir cuidadosamente el proceso para hacer las respectivas muestras y proceder a hacer tinción de gram para analizar los microorganismos presentes.
Materiales
1 erlenmeyer
100 ml CALDO CASO
1 Autoclave
1 Mechero
1 Pipeta
1mezcaldor
1-2 cajas de petri

AGAR NUTRITIVO
La preparación de 100 ml de agar se elaboró con 7 gr de agar en polvo en 250 ml de agua destilada.
Esterilizar en autoclave
Calentar en el mechero por ultima ves
Servir en dos cajas de Petri para hacer un cultivo diferencial, dejar solidificar-gelanitizar
De la dilución elaborada se toma 1 ml de 100 para una caja de Petri y se hace la siembraDe la dilución 103 tomar 1 ml para la otra caja de Petri y se elabora la siembra
Realizar incubación de las cjas de Petri a 25°C

Materiales
1 erlenmeyer
250 ml Agar nutritivo
1 Autoclave
1 Mechero
1 Pipeta
1 mezcaldor
2 cajas de petri





4 cajas de Petri estilizadas (para siembra)
4-5 tubos de ensayo (para diluciones sucesivas)
1 Incubadora
1 Gradilla
2 Asas de siembra1 Mechero
2-3 Matraz Erlenmeyer (para elaboración del caldo metano génico)
5 Pipetas
1 Autoclave(para esterilización del medio de incubación)
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BACTERIAS METANOGENICAS (segunda parte medio selectivo)










3. Barker-Taha (MB) para Methanobacterium (para 100 ml)
Etanol
1 ml
Fosfato dipotsico
0.5g...