Bioquimixca

Acta bioquímica clínica latinoamericana
versión On-line ISSN 1851-6114
Acta bioquím. clín. latinoam. v.40 n.4 La Plata oct./dic. 2006
 
CULTIVOS CELULARES
Detección de contaminación por Mollicutes en cultivos celulares mediante amplificación del gen 16S rARN
Detection of Mollicutes contamination in cell cultures by 16S rRNA amplification
Gustavo Sobarzo Aguayo1*, María Angélica MartínezTagle2*, Roberto Vidal Alvarez3*, María Cristina Martínez Torrens4**, Luis Fidel Avendaño Carvajal5***
1. Médico veterinario.
2. Médico veterinario, MSc. Ph.D.
3. Alumna 7º año Medicina
4. Médico cirujano.
* Programa de Microbiología y Micología, Instituto de Ciencias Biomédicas, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. Independencia 1027, Santiago, Chile.
** Interna 7º añoMedicina, Facultad de Medicina, Universidad de Chile.
*** Programa de Virología, Instituto de Ciencias Biomédicas, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. Independencia 1027, Santiago, Chile.
Resumen
La contaminación de los cultivos celulares por Mollicutes es un hecho frecuente en los laboratorios, reportándose hasta un 80% de cultivos contaminados, lo que resulta en ensayos experimentalespoco confiables y en productos biológicos poco seguros. Los objetivos del presente estudio fueron: estimar la frecuencia de micoplasmas como contaminantes de cultivos celulares y analizar la eficiencia de un ensayo de PCR que emplea como ADN blanco al gen 16S rARN de los Mollicutes. Se estudiaron 39 cultivos celulares, representativos de las líneas celulares más utilizadas y 17 cultivos celularesprimarios, recibidos para análisis de contaminación, entre julio y diciembre de 2005. Se detectaron micoplasmas en 18/39 (46,2%) cultivos de líneas celulares, mientras que no se detectaron micoplasmas en los cultivos celulares primarios. El análisis mediante HpaII del espacio intergénico 16S-23S rARN de 6 cultivos positivos determinó dos patrones de restricción. La secuenciación del ADN de dosamplicones identificó aMycoplasma hyorhinis y a Mycoplasma salivarium como micoplasmas contaminantes. La sensibilidad analítica de la PCR, determinada a partir de diluciones de un cultivo de Mycoplasma hominis fue 0,01 u.c.c./mL (unidades cambiadoras de color por mL), mientras que su especificidad analítica fue 100%. Los resultados de este estudio confirman la importancia de los micoplasmas comocontaminantes de cultivos celulares y sugieren que la PCR dirigida al gen 16S rARN es un procedimiento útil para el diagnóstico de estos microorganismos.
Palabras clave: Mollicutes * contaminación * cultivos celulares
Summary
Up to 80% of cell cultures have been reported to be contaminated with Mollicutes, causing unreliable experimental results and giving rise to unsafe biological products. The aimsof this study were to estimate the frequency of mycoplasmas as contaminants in cell cultures, and to analyze the performance of a PCR assay targeting the 16S rRNA of Mollicutes. Thirty-nine cell cultures representing the most used lines of cell cultures and 17 primary cell cultures submitted for detection of mycoplasma contamination were studied between July and December 2005. Mycoplasmas weredetected in 18/39 (46.2%) cell line cultures, and in none of the primary cell cultures. HpaII analysis of the 16S-23S rRNA intergenic space of 6 positive cultures belonging to different laboratories gave two different restriction patterns. The sequentiation of each of the two patterns identified Mycoplasma hyorhinis andMycoplasma salivarium as the contaminant mycoplasmas. The analytic sensitivity ofthe 16S rRNA PCR was 0.01 color-changing units per mL, as determined for dilutions of a Mycoplasma hominis culture, whereas the analytical specificity was 100%. In conclusion, these results reaffirm the importance of mycoplasmas as cell culture contaminants, and suggest that 16S rRNA PCR is a reliable method for detection of these organisms as cell culture contaminants.
Key words: Mollicutes *...