biorad
Páginas: 19 (4547 palabras)
Publicado: 5 de julio de 2013
Introducción y Principios
El ensayo de proteínas Bio-Rad DC es un ensayo colorimétrico para la concentración de la proteína siguiente solubilización de detergente. La reacción es similar al ensayo Lowry, pero con las siguientes mejoras: La reacción alcanza el 90% de su máximo desarrollo de color dentro de 15 minutos el consiguiente ahorro de tiempo valioso, y el color no cambia más de 5% en 1hora o 10% en 2 horas después de la adición de los reactivos.
El ensayo se basa en la reacción de proteína con una solución de tartrato de cobre alcalino y reactivo de Folin. Al igual que con el ensayo de Lowry, hay dos pasos que conducen a desarrollo de color: La reacción entre la proteína y el cobre en un medio alcalino, y la posterior reducción de reactivo de Folin. El desarrollo de cobretratado con color se debe a principalmente los aminoácidos tirosina y triptófano, y en menor medida, cistina, cisteína, y histidine.1, 2 Proteínas efecto una reducción del reactivo de Folin por la pérdida de 1, 2, o 3 átomos de oxígeno, con lo que la producción uno o más de varias especies reducidas posibles que tienen un característico color azul con el máximo de absorbancia a 750 nm y laabsorbancia mínima a 405 nm.
Sección 2
Descripción del producto
Paquete de reactivo (número de catálogo 500 a 0116) incluye:
250 ml de un reactivo, una solución de tartrato de cobre alcalino
2000 ml Reactivo B, un reactivo de Folin diluido
5 ml de reactivo S
(Suficiente para 500 ensayos estándar o 10.000 ensayos de microplaca)
El paquete de reactivo se puede comprar como un kit con unpatrón glob-Ulin gamma bovina (kit de número de catálogo 500-0111) o estándar de albúmina sérica bovina (kit de número de catálogo 500-0112).
Sección 3
Materiales necesarios pero no suministrados
Para el ensayo estándar:
Tubos de ensayo de 13 mm x 100
Depósito de reactivo de trabajo (el tamaño depende de la cantidad de reactivo que se prepara)
Pipetas dispensar con precisión 100 l, 500 l, y4,0 ml
Se graduó de cilindros o pipetas para la preparación de los reactivos
Espectrofotómetro que permita a 750 nm
mezclador de vórtice
Plástico o vidrio cubetas de 1 cm de longitud de recorrido adaptados a laboratorio espectrofotómetro
Gradilla para sostener 13 tubos de ensayo x 100 mm
Para el ensayo de microplaca:
Las placas de microtitulación
Depósito de reactivo detrabajo
Pipetas para la preparación de los reactivos
Pipetas dispensación exacta 5 l, 25 l, y 200 l
Lector de microplacas ajustado a 750 nm
3.1 Consideraciones de seguridad
Protección para los ojos y guantes se deben usar durante el uso de este producto. Consulte la hoja al final de este manual para obtener información adicional.
Sección 4
Compatibilidad Reactivo
Los compuestosenumerados se ensayaron y se encontró que ser compatible con el ensayo de proteínas Bio-Rad DC. En algunos casos, la presencia de una o más de estas sustancias será efectuar un cambio en la respuesta de la proteína a los reactivos de ensayo, por lo tanto, el estándar debe prepararse siempre en el mismo tampón como la muestra.
10% SDS 1% de CHAPS 2% de NP-40
1% de Triton † X-100 1% CHAPSO 1%Thesit †
1% de Tween † 20 1% de octil-glucósido 1% de Brij † -35
0,2% C12E8 * 0,1 M de Tris, pH 8 M de NaOH 0,5
0,5 M de HCl 0,5 M (NH4) 2SO4 0,025 M EDTA
0,05 M de CaCl2 0,4 M de guanidina HCl 4 M urea
0,05% azida sódica 1 mM DTT (ditiotreitol)
Nota: El ensayo de proteínas DC es incompatible con 2-mercaptoetanol (BME)
† BRIJ y TWEEN son marcas registradas de Atlas Chemical registrados.Thesit es una marca registrada de Desitin Arzneimittel GMBH. TRITON es una marca registrada de Rohm and Haas.
* octaetilenglicol dodecil éter
instrucciones
5.1 Protocolo de Ensayo Estándar
1. Preparación de reactivo de trabajo
Añadir 20 l de reactivo S a cada ml de reactivo A que serán necesarios para la ejecución. (Este reactivo de trabajo A 'es estable durante una semana a pesar de...
El ensayo de proteínas Bio-Rad DC es un ensayo colorimétrico para la concentración de la proteína siguiente solubilización de detergente. La reacción es similar al ensayo Lowry, pero con las siguientes mejoras: La reacción alcanza el 90% de su máximo desarrollo de color dentro de 15 minutos el consiguiente ahorro de tiempo valioso, y el color no cambia más de 5% en 1hora o 10% en 2 horas después de la adición de los reactivos.
El ensayo se basa en la reacción de proteína con una solución de tartrato de cobre alcalino y reactivo de Folin. Al igual que con el ensayo de Lowry, hay dos pasos que conducen a desarrollo de color: La reacción entre la proteína y el cobre en un medio alcalino, y la posterior reducción de reactivo de Folin. El desarrollo de cobretratado con color se debe a principalmente los aminoácidos tirosina y triptófano, y en menor medida, cistina, cisteína, y histidine.1, 2 Proteínas efecto una reducción del reactivo de Folin por la pérdida de 1, 2, o 3 átomos de oxígeno, con lo que la producción uno o más de varias especies reducidas posibles que tienen un característico color azul con el máximo de absorbancia a 750 nm y laabsorbancia mínima a 405 nm.
Sección 2
Descripción del producto
Paquete de reactivo (número de catálogo 500 a 0116) incluye:
250 ml de un reactivo, una solución de tartrato de cobre alcalino
2000 ml Reactivo B, un reactivo de Folin diluido
5 ml de reactivo S
(Suficiente para 500 ensayos estándar o 10.000 ensayos de microplaca)
El paquete de reactivo se puede comprar como un kit con unpatrón glob-Ulin gamma bovina (kit de número de catálogo 500-0111) o estándar de albúmina sérica bovina (kit de número de catálogo 500-0112).
Sección 3
Materiales necesarios pero no suministrados
Para el ensayo estándar:
Tubos de ensayo de 13 mm x 100
Depósito de reactivo de trabajo (el tamaño depende de la cantidad de reactivo que se prepara)
Pipetas dispensar con precisión 100 l, 500 l, y4,0 ml
Se graduó de cilindros o pipetas para la preparación de los reactivos
Espectrofotómetro que permita a 750 nm
mezclador de vórtice
Plástico o vidrio cubetas de 1 cm de longitud de recorrido adaptados a laboratorio espectrofotómetro
Gradilla para sostener 13 tubos de ensayo x 100 mm
Para el ensayo de microplaca:
Las placas de microtitulación
Depósito de reactivo detrabajo
Pipetas para la preparación de los reactivos
Pipetas dispensación exacta 5 l, 25 l, y 200 l
Lector de microplacas ajustado a 750 nm
3.1 Consideraciones de seguridad
Protección para los ojos y guantes se deben usar durante el uso de este producto. Consulte la hoja al final de este manual para obtener información adicional.
Sección 4
Compatibilidad Reactivo
Los compuestosenumerados se ensayaron y se encontró que ser compatible con el ensayo de proteínas Bio-Rad DC. En algunos casos, la presencia de una o más de estas sustancias será efectuar un cambio en la respuesta de la proteína a los reactivos de ensayo, por lo tanto, el estándar debe prepararse siempre en el mismo tampón como la muestra.
10% SDS 1% de CHAPS 2% de NP-40
1% de Triton † X-100 1% CHAPSO 1%Thesit †
1% de Tween † 20 1% de octil-glucósido 1% de Brij † -35
0,2% C12E8 * 0,1 M de Tris, pH 8 M de NaOH 0,5
0,5 M de HCl 0,5 M (NH4) 2SO4 0,025 M EDTA
0,05 M de CaCl2 0,4 M de guanidina HCl 4 M urea
0,05% azida sódica 1 mM DTT (ditiotreitol)
Nota: El ensayo de proteínas DC es incompatible con 2-mercaptoetanol (BME)
† BRIJ y TWEEN son marcas registradas de Atlas Chemical registrados.Thesit es una marca registrada de Desitin Arzneimittel GMBH. TRITON es una marca registrada de Rohm and Haas.
* octaetilenglicol dodecil éter
instrucciones
5.1 Protocolo de Ensayo Estándar
1. Preparación de reactivo de trabajo
Añadir 20 l de reactivo S a cada ml de reactivo A que serán necesarios para la ejecución. (Este reactivo de trabajo A 'es estable durante una semana a pesar de...
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