Biotecnilogia Y La Produccion De Antibioticos
Páginas: 11 (2621 palabras)
Publicado: 1 de diciembre de 2012
Universidad Autónoma de Aguascalientes Laboratorio de Ingeniería Genética.
Práctica N°2 “Transformación genética de bacterias por choque térmico”.
INTRODUCCIÓN:
FIG.N°1. Se aprecia un diagrama de trasformación genética mediante la cual el plásmido es insertado en la bacteria para que esta forme parte de su genoma y así sintetice la proteína de interés biotecnológico.
La transformaciónes un proceso por el cual las células captan DNA libre presente en el medio. Es un fenómeno que ocurre de forma natural en muchas bacterias, pero la eficacia del proceso varía enormemente de unas especies a otras. Para que la transformación tenga lugar, la bacteria tiene que encontrarse en el llamado estado de competencia, que ocurre en determinadas condiciones fisiológicas; en este estado, labacteria presenta alteraciones en su pared y membrana celulares, que permiten la entrada de ácidos nucleicos en la célula.
En el laboratorio se ha conseguido poner a punto técnicas que inducen el estado de competencia en bacterias que no lo presentan de forma natural, como es el caso de E. coli. Estas técnicas se basan en diversos tratamientos químicos o físicos que producen microporos en lacélula, lo que permite la introducción del DNA exógeno (transformación) de modo bastante eficiente. Uno de los métodos físicos es la electroporación, consistente en inducir la competencia mediante la aplicación de un pulso eléctrico muy breve e intenso. Dicha competencia se puede inducir con tratamientos químicos utilizando compuestos como el cloruro cálcico. Hay que tener en cuenta sin embargo que trasestos tratamientos no todas las células del cultivo se hacen competentes. La transformación en el laboratorio es una técnica rutinaria de enorme utilidad, que nos permite introducir prácticamente cualquier plásmido en su forma circular o superenrollada en casi cualquier tipo de bacteria. El método que se describe a continuación es, por su simplicidad, uno de los más utilizados para transformar E.coli. Para detectar la transformación, el DNA introducido llevará un marcador seleccionable en el medio adecuado. (Nohue H et al,1991)
FIG.N°2.Proceso de transformación de ilustrando en particular la técnica a utilizar.
bacterias,
El PGLO plásmido es una ingeniería plásmido utilizado en la biotecnología como un vector para la creación deorganismos modificados genéticamente . El plásmidocontiene varios genes indicadores , en particular para laproteína verde fluorescente (GFP) y el gen de resistencia a ampicilina. GFP fue aislado de la gelatina de pescado Aequorea victoria . Debido a que comparte una bidireccional promotor con un gen de metabolizar la arabinosa , el gen GFP se expresa en la presencia de arabinosa , lo que hace que el organismo transgénico fluorescencia bajo luz UV. GFP puede ser inducida en bacterias que contienen el plásmido PGLO haciéndolos crecer sobre placas de arabinosa +.
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Universidad Autónoma de Aguascalientes Laboratorio de Ingeniería Genética.
Práctica N°2 “Transformación genética de bacterias por choque térmico”.
PGLO se compone de tres genes que se unen mediante tecnología de ADN recombinante. Son los siguientes:-Bla, quecodifica para la enzima beta-lactamasa dando la resistencia transformado bacterias a la familia de beta-lactama de antibióticos (tales como de la penicilina familia) -araC, una región de promotor que regula la expresión de GFP ( específicamente, el gen GFP se expresa sólo en la presencia de arabinosa )-GFP, la proteína verde fluorescente Como la mayoría de otras circulares plásmidos , el plásmidoPGLO contiene un origen (ori), que es una región de replicación del plásmido donde se originan. El PGLO plásmido se hizo famoso por los investigadores en Francia que lo utilizaron para producir un color verde fluorescente conejo llamado Alba . Otras características de PGLO, como la mayoría de otros plásmidos, incluyen: un marcador seleccionable, Ori ( origen de replicación ), y un MCS ( sitio...
Práctica N°2 “Transformación genética de bacterias por choque térmico”.
INTRODUCCIÓN:
FIG.N°1. Se aprecia un diagrama de trasformación genética mediante la cual el plásmido es insertado en la bacteria para que esta forme parte de su genoma y así sintetice la proteína de interés biotecnológico.
La transformaciónes un proceso por el cual las células captan DNA libre presente en el medio. Es un fenómeno que ocurre de forma natural en muchas bacterias, pero la eficacia del proceso varía enormemente de unas especies a otras. Para que la transformación tenga lugar, la bacteria tiene que encontrarse en el llamado estado de competencia, que ocurre en determinadas condiciones fisiológicas; en este estado, labacteria presenta alteraciones en su pared y membrana celulares, que permiten la entrada de ácidos nucleicos en la célula.
En el laboratorio se ha conseguido poner a punto técnicas que inducen el estado de competencia en bacterias que no lo presentan de forma natural, como es el caso de E. coli. Estas técnicas se basan en diversos tratamientos químicos o físicos que producen microporos en lacélula, lo que permite la introducción del DNA exógeno (transformación) de modo bastante eficiente. Uno de los métodos físicos es la electroporación, consistente en inducir la competencia mediante la aplicación de un pulso eléctrico muy breve e intenso. Dicha competencia se puede inducir con tratamientos químicos utilizando compuestos como el cloruro cálcico. Hay que tener en cuenta sin embargo que trasestos tratamientos no todas las células del cultivo se hacen competentes. La transformación en el laboratorio es una técnica rutinaria de enorme utilidad, que nos permite introducir prácticamente cualquier plásmido en su forma circular o superenrollada en casi cualquier tipo de bacteria. El método que se describe a continuación es, por su simplicidad, uno de los más utilizados para transformar E.coli. Para detectar la transformación, el DNA introducido llevará un marcador seleccionable en el medio adecuado. (Nohue H et al,1991)
FIG.N°2.Proceso de transformación de ilustrando en particular la técnica a utilizar.
bacterias,
El PGLO plásmido es una ingeniería plásmido utilizado en la biotecnología como un vector para la creación deorganismos modificados genéticamente . El plásmidocontiene varios genes indicadores , en particular para laproteína verde fluorescente (GFP) y el gen de resistencia a ampicilina. GFP fue aislado de la gelatina de pescado Aequorea victoria . Debido a que comparte una bidireccional promotor con un gen de metabolizar la arabinosa , el gen GFP se expresa en la presencia de arabinosa , lo que hace que el organismo transgénico fluorescencia bajo luz UV. GFP puede ser inducida en bacterias que contienen el plásmido PGLO haciéndolos crecer sobre placas de arabinosa +.
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Universidad Autónoma de Aguascalientes Laboratorio de Ingeniería Genética.
Práctica N°2 “Transformación genética de bacterias por choque térmico”.
PGLO se compone de tres genes que se unen mediante tecnología de ADN recombinante. Son los siguientes:-Bla, quecodifica para la enzima beta-lactamasa dando la resistencia transformado bacterias a la familia de beta-lactama de antibióticos (tales como de la penicilina familia) -araC, una región de promotor que regula la expresión de GFP ( específicamente, el gen GFP se expresa sólo en la presencia de arabinosa )-GFP, la proteína verde fluorescente Como la mayoría de otras circulares plásmidos , el plásmidoPGLO contiene un origen (ori), que es una región de replicación del plásmido donde se originan. El PGLO plásmido se hizo famoso por los investigadores en Francia que lo utilizaron para producir un color verde fluorescente conejo llamado Alba . Otras características de PGLO, como la mayoría de otros plásmidos, incluyen: un marcador seleccionable, Ori ( origen de replicación ), y un MCS ( sitio...
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