biotecnologia

ADN RECOMBINANTE O CLONACIÓN CELULAR
La técnica del ADN recombinante se utiliza en estudios sobre la regulación de la expresión génica, en la regulación de la producción comercial de síntesis de proteínas como la Insulina o la hormona del crecimiento, en el desarrollo de organismos transgénicos y en la amplificación del ADN, es decir, en obtener un gran número de copias de un gen determinado.En este último caso, existe una técnica mejor, denominada con las siglas PCR.

1.- Primer técnica PCR
La técnica consiste en introducir el gen seleccionado en el interior de un vector y éste, a su vez, dentro de una célula, denominada célula anfitriona. Aprovechando la maquinaria celular, el gen se expresa, sintetizándose así la proteína codificada en el gen. Además, al dividirse la célula, lasnuevas células formadas contienen ese gen que también sintetizan esa proteína. Se genera un grupo celular que contiene un genoma distinto.
Las etapas en la producción de ADN recombinante son las siguientes:
1. Preparación de la secuencia del ADN para su clonación
2. Preparación de un vector de clonación
3. Formación del ADN recombinante
4. Introducción del ADN recombinante en una célulaanfitriona
5. Propagación del cultivo
6. Detección y selección de clones recombinantes
 


1. Preparación de la secuencia del ADN para su clonación
Es la parte esencial del proceso, ya que el ADN debe separarse y concentrarse.
Partimos de células con núcleo, que deben ser lisadas (rotas).
Las proteínas estructurales, enzimas, ARN y restos moleculares deben separarse del ADN.
El ADN obtenidose concentra y se fragmenta por acción de las enzimas de restricción.
Se aísla el ADN que se desea clonar, por ejemplo, mediante cromatografía líquida o por centrifugación.
Si el ADN debe expresarse hay que añadir los segmentos reguladores de la expresión génica.
 


2. Preparación de un vector de clonación
El vector es el portador de la secuencia de ADN que se desea clonar. Un vector debepresentar las siguientes características:
Una pequeña secuencia de ADN fácil de aislar, como, por ejemplo, un plásmido.
Contener distintos puntos de ataque aenzimas de restricción y que sean conocidos.
Poder ser incluido en la célula anfitriona con facilidad.
Replicarse de forma independiente al ADN de la célula anfitriona.
Poseer un gen marcador con el que puedan identificarse y seleccionarlas células clonadas. Un ejemplo de marcador puede ser la resistencia a un antibiótico.
 
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Las etapas del proceso consisten en:
1. Cortar el vector conenzimas de restricción, las mismas enzimas que se utilizaron  para cortar el ADN que se quiere insertar.
2. Unir el vector y el ADN que se va a clonar mediante los llamadosextremos cohesivos, o pegajosos, o escalonados.
Una vez que el ADNha sido introducido en el vector se denomina ADN inserto, o simplemente, inserto.
Los tipos de vectores que se utilizan suelen ser plásmidos, virus como el fago , cromosomas creados de forma artificial y quimeras.
 

 
3. Formación del ADN recombinante
En esta etapa se produce la unión covalente del vector y el ADN inserto mediante una ligasa. Así se realiza el sellado de la llamada Mella,Muesca o Nick.
 
4. Introducción del ADN recombinante en la célula anfitriona
Para la clonación (replicación del ADN recombinante) se necesita la maquinaria celular. Por ello, hay que introducir el ADN recombinante en una célula anfitriona.
Los tipos de células anfitrionas son:
Células bacterianas: son las más utilizadas, ya que tienen una alta velocidad de replicación, un bajo coste demantenimiento de las colonias y son fácilmente manipulables.
Células eucariotas: aunque las células eucariotas son, en general, difíciles de mantener se usan levaduras y células tumorales:
Levaduras: se utilizan en procesos relacionados con la investigación de la expresión y la regulación génica y la síntesis de proteínas eucariotas.
Células tumorales: apropiadas en procesos de clonación, ya que la...