Biuret Y Brandford
Páginas: 8 (1964 palabras)
Publicado: 13 de mayo de 2012
Universidad Nacional Andrés Bello
Facultad de Ciencias de la Salud
Departamento de Ciencias Biológicas
Laboratorio de Bioquímica General BIO 265
LABORATORIO Nº1
“DETERMINACIÓN DE PROTEINAS POR MÉTODOS DE BIURET Y BRADFORD”
Integrantes: Silvana Avendaño M.Cristopher Ramírez A.
Sección: 2
Fecha de entrega: 20 abril 2012.
Profesores: Hegaly Mendoza V.
Samuel Parra Aguilar
Introducción
Las proteínas sonmacromoléculas construidas por aminoácidos, en secuencia lineal y de tamaño variable. Así, como su nombre lo indica están compuestas por un grupo amino, un grupo carboxílico y un radical los cuales se encuentran unidos a un carbono central, como lo muestra la siguiente figura:
[pic]
La determinación de estos polímeros es muy importante y por elloexisten variados métodos mediante los cuales se pueden identificar. En este práctico utilizaremos dos métodos sencillos, el método de Biuret y el método de Bradford.
El método de Biuret, utiliza el reactivo Biuret; que cuando detecta la presencia de compuestos con dos o más enlaces peptídicos la reacción da positiva adquiriendo una coloración violeta (1). El desarrollo de la coloración esespecífico para cada proteína y se determina mediante un espectrofotómetro a 540nm (1). Por otro lado una desventaja de este método es su sensibilidad relativamente baja: ya que es aplicable sólo a muestras con cantidades mayores a los 100μg de proteína.
El segundo método, llamado método de Bradford, se fundamenta en cuantificar la unión de un colorante; azul de Coomasie G-250, a una proteínadesconocida y la compara con cantidades de una proteína estándar, que por lo general es albúmina suero de bovino (BSA). Dando como resultado un cambio en el color que se puede detectar mediante un espectrofotómetro a 595nm.
Una ventaja de este método es que presenta una extremada sensibilidad, detectando cantidades de 1μg o incluso inferiores. Sin embargo el principal inconveniente radica en que elcolorante no se fija igualmente a todas las proteínas y el color no es estable en el tiempo, lo que conlleva a la precipitación de las proteínas. No obstante, su sencillez y su sensibilidad han hecho de este método uno de los más utilizados en el laboratorio de bioquímica. (3)
En este práctico se aplicará cada uno de los términos analizados anteriormente para determinar la concentración deproteínas de una muestra problema mediante estos dos métodos.
Objetivos
a) Comprender la base de los métodos Biuret y Bradford para la determinación de proteínas
b) Determinar cuantitativamente la cantidad de proteínas con el método de Biuret en función de la concentración de las muestras utilizando una solución patrón de albúmina.
c) Determinar cuantitativamente lacantidad de proteínas a través del método de Bradford utilizando una solución patrón de albúmina.
Materiales y Métodos:
Se realizará una cuantificación de proteínas a través de dos métodos diferentes; en primer lugar mediante el Método de Biuret, en el que se ocupará como reactivo sulfato cúprico en medio alcalino (reactivo Biuret).
Para esto se requieren 7 tubos de ensayo, colocandovolúmenes ascendentes de 2; 4; 6; 8 y 10 mg/mL de solución estándar de albúmina, dejando un último tubo para una alícuota de muestra problema de concentración X que se deberá determinar (tubo 7).
Cada uno de los 7 tubos se enrasa a un volumen final de 1000μL de agua destilada.
Añadir 4mL de reactivo Biuret a cada tubo y dejar que se desarrolle la coloración durante 30min., para luego...
Facultad de Ciencias de la Salud
Departamento de Ciencias Biológicas
Laboratorio de Bioquímica General BIO 265
LABORATORIO Nº1
“DETERMINACIÓN DE PROTEINAS POR MÉTODOS DE BIURET Y BRADFORD”
Integrantes: Silvana Avendaño M.Cristopher Ramírez A.
Sección: 2
Fecha de entrega: 20 abril 2012.
Profesores: Hegaly Mendoza V.
Samuel Parra Aguilar
Introducción
Las proteínas sonmacromoléculas construidas por aminoácidos, en secuencia lineal y de tamaño variable. Así, como su nombre lo indica están compuestas por un grupo amino, un grupo carboxílico y un radical los cuales se encuentran unidos a un carbono central, como lo muestra la siguiente figura:
[pic]
La determinación de estos polímeros es muy importante y por elloexisten variados métodos mediante los cuales se pueden identificar. En este práctico utilizaremos dos métodos sencillos, el método de Biuret y el método de Bradford.
El método de Biuret, utiliza el reactivo Biuret; que cuando detecta la presencia de compuestos con dos o más enlaces peptídicos la reacción da positiva adquiriendo una coloración violeta (1). El desarrollo de la coloración esespecífico para cada proteína y se determina mediante un espectrofotómetro a 540nm (1). Por otro lado una desventaja de este método es su sensibilidad relativamente baja: ya que es aplicable sólo a muestras con cantidades mayores a los 100μg de proteína.
El segundo método, llamado método de Bradford, se fundamenta en cuantificar la unión de un colorante; azul de Coomasie G-250, a una proteínadesconocida y la compara con cantidades de una proteína estándar, que por lo general es albúmina suero de bovino (BSA). Dando como resultado un cambio en el color que se puede detectar mediante un espectrofotómetro a 595nm.
Una ventaja de este método es que presenta una extremada sensibilidad, detectando cantidades de 1μg o incluso inferiores. Sin embargo el principal inconveniente radica en que elcolorante no se fija igualmente a todas las proteínas y el color no es estable en el tiempo, lo que conlleva a la precipitación de las proteínas. No obstante, su sencillez y su sensibilidad han hecho de este método uno de los más utilizados en el laboratorio de bioquímica. (3)
En este práctico se aplicará cada uno de los términos analizados anteriormente para determinar la concentración deproteínas de una muestra problema mediante estos dos métodos.
Objetivos
a) Comprender la base de los métodos Biuret y Bradford para la determinación de proteínas
b) Determinar cuantitativamente la cantidad de proteínas con el método de Biuret en función de la concentración de las muestras utilizando una solución patrón de albúmina.
c) Determinar cuantitativamente lacantidad de proteínas a través del método de Bradford utilizando una solución patrón de albúmina.
Materiales y Métodos:
Se realizará una cuantificación de proteínas a través de dos métodos diferentes; en primer lugar mediante el Método de Biuret, en el que se ocupará como reactivo sulfato cúprico en medio alcalino (reactivo Biuret).
Para esto se requieren 7 tubos de ensayo, colocandovolúmenes ascendentes de 2; 4; 6; 8 y 10 mg/mL de solución estándar de albúmina, dejando un último tubo para una alícuota de muestra problema de concentración X que se deberá determinar (tubo 7).
Cada uno de los 7 tubos se enrasa a un volumen final de 1000μL de agua destilada.
Añadir 4mL de reactivo Biuret a cada tubo y dejar que se desarrolle la coloración durante 30min., para luego...
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