Calibración de Espectrofotometro

GUIA PARA LA VERIFICACION DE ESPECTOFOTOMETROS UV-VISIBLE UTILIZADOS EN EL ANALISIS
DE SUELO Y AGUA.
Azcarate M.P.(1); Kloster N.S. (2) ; Ostinelli M. (3); Carreira D. (3)
1 Laboratorio de Análisis Agronómicos. E.E.A. Chubut. INTA. Ex Ruta 25 Km 1480. (9100) Trelew. Chubut. Argentina. EMail:
mpazcarate@yahoo.com.ar
2 Laboratorio de Suelo y Agua. E.E.A. Anguil, INTA. RN Nº5 km 580. (6326)Anguil. La Pampa. Argentina. E-Mail:
nkloster@anguil.inta.gov.ar
3 Laboratorio de Suelos. Instituto de Suelos. INTA Castelar. Las Cabañas y De Los Reseros s/n (1712) Villa Udaondo.
Castelar. Buenos Aires. Argentina. E-Mail: mostinelli@cnia.inta.gov.ar; dcarreira@cnia.inta.gov.ar.
ÁREA TEMÁTICA. (Marque una opción) REQUISITOS TÉCNICOS
RESUMEN.
La espectrofotometría es una técnica ampliamenteutilizada
en los laboratorios para el análisis cuantitativo de
numerosos compuestos, debido principalmente a su
sencillez operativa y a la rapidez en el análisis. La
concentración de una sustancia puede ser calculada a partir
de la cantidad de luz absorbida por una muestra, en el
rango del espectro del ultravioleta (UV) y visible (Vis)
aplicando la ley de Lambert-Beer. Por ello, para generardatos confiables es de gran importancia la verificación
previa del funcionamiento del espectrofotómetro. Los
principales parámetros a controlar en estos equipos son: la
exactitud de la longitud de onda, la exactitud y precisión
fotométrica, la linealidad fotométrica y la verificación de la
luz difusa o parásita.
PALABRAS CLAVE. Espectrofotómetro. UV-Vis.
Verificación. Suelo. Agua
1.Introducción
En el análisis de muestras de suelo y agua, el
espectrofotómetro constituye una herramienta fundamental
para la cuantificación de nutrientes y contaminantes. Del
correcto desempeño de este instrumento dependerá en gran
medida la calidad de los resultados obtenidos, por lo que se
considera un equipo crítico en los ensayos de laboratorio y
que necesariamente deberá ser verificadoperiódicamente.
2. Objetivos
El objetivo de ésta guía es proporcionar información útil
para verificar el correcto funcionamiento de los
espectrofotómetros UV-Vis del laboratorio.
3. Campo de aplicación
Espectrofotómetros UV-Vis utilizados para el análisis de
muestras de suelo y agua para uso agropecuario.
4. Fundamentos
4.1. Equipamiento
La mayoría de los instrumentos espectroscópicos, como elespectrofotómetro, están constituidos por cinco
componentes: lámpara o fuente luminosa, selector de
longitud de onda , celda para alojar la muestra, detector
de radiación, y amplificador de señal con medidor o
registrador.
4.2. Teoría
Desde hace muchos años se han utilizado las propiedades
de la luz y su interacción con las sustancias para
identificarlas y determinar la concentración delas mismas.
Estos estudios se basan en la estrecha relación que existe
entre la absorción de la radiación electromagnética de las
sustancias, tanto en la zona del espectro visible como en el
ultravioleta e infrarrojo, y su concentración.
Si un haz de luz monocromático paralelo (I0) atraviesa
una cubeta de b cm de paso óptico, conteniendo una
solución con una concentración (c) de una especieabsorbente. A causa de la interacción de la luz y de las
partículas absorbentes la intensidad del haz se atenúa de I0
a I.
La transmitancia (T) de la solución es entonces la fracción
de la radiación incidente transmitida por la solución:
T = I / I0 (1)
También puede expresarse en forma porcentual:
T (%) = I / I0 x 100 (2)
VI IBEROLAB
2
A fin de obtener ecuaciones de ajuste lineal seutiliza su
transformada logarítmica conocida como absorbancia (A)
de una solución y definida por la ecuación
A = - log T = log I0/I (3)
La absorbancia de una solución aumenta cuanto mayor es la
atenuación del haz de luz, ocurriendo lo inverso en la
transmitancia. La absorbancia es directamente proporcional
a la longitud b de la trayectoria a través de la solución, y a
la concentración c...