callogenesis
Páginas: 7 (1646 palabras)
Publicado: 27 de junio de 2013
Obtención de callo a partir de raiz de zanahoria (Daucus carota)
De la Cruz, K & Ortega, D
Escuela politécnica del ejército, Departamento de Ciencias de la vida
Carrera de Ing. en Biotecnología
Cultivo de tejidos
RESUMEN
Se realizó la obtención de callo a partir de un explante de zanahoria para lo cual se preparó el medio de cultivo MS enriquecido con: 30g de azúcar, 6g de agar, 0,5 mg/Lde BAP y 3mg/L de 2,4-D, esencial para cumplir con este propósito. Se ha establecido un protocolo de desinfección para el explante de zanahoria que consistió en sumergir la zanahoria en detergente al 1% durante 15 minutos; realizar 2 lavados con agua destilada y 1 con agua estéril. Por último se colocó a la zanahoria en cloro al 5% con 3 gotas de tween 20 durante 10 minutos. Finalmente serealizaron cortes transversales a la raíz de zanahoria sembradas en el medio. Se observaron los resultados al cabo de 5, 10 y 15 días, donde hubo gran variedad de resultados los cuales se puede observar en la tabla 1 y tabla 2.
INTRODUCCIÓN:
En 1902, Haberlandt propuso a teoría de que todas las células vegetales tienen la capacidad de formar plantas completas es decir, que tienentotipontecialidad. Sin embargo, esta hipótesis no pudo ser demostrada en aquel tiempo (Krikorian et al., 1969)
White (1939) informó acerca de la inducción de yemas adventicias in vitro a partir de callos de Nicotiana glauca x. N. langsdorfii y Nobecourt (1939) obtuvo raíces adventicias de un callo de zanahoria (Daucus carota). Estos experimentos respaldaron indirectamente la teoría de totipotencialidad de lascélulas vegetales (Roca, W. Mroginski, L. 1993).
Todos los tejidos vegetales tienen capacidad para formar callos in vitro; sin embargo, relativamente pocos explantes tienen la habilidad para producir callos embriogénicos. Comúnmente se han usado como explantes partes de plántulas como cotiledones, hipocótilos y embriones; adicionalmente, se han usado ápices caulinares, segmentos de tallos, hojas,raíces e inflorescencias inmaduras (Roca, W. Mroginski, L. 1993).
La regeneración de plantas directamente de los explantes, o a partir de callos, por medio de la organogénesis o de la embriogénesis somática se ha utilizado como una alternativa en los métodos de propagación (Litz, R. y Jarret, R. 2004). La totipotencialidad de las células vegetales cultivadas in vitro fue establecida porReinert (1958) y Steward et al. (1958), quienes describieron la inducción de embriones somáticos a partir de callos derivados del ápice radical de la zanahoria Daucus carota (Litz, R. y Jarret, R. 2004).
Se necesita la presencia de una auxina para la iniciación de un callo embriogénico. Usualmente se emplea el 2, 4–D, el cual aparentemente brinda el estímulo o inicia la inducción de la embriogénesissomática en el callo (Litz, R. y Jarret, R. 2004).
Un factor muy importante de los callos, desde el punto de vista funcional, es su crecimiento para formar raíces, tallos y embriones viables, es decir capaces de regenerar plantas completas. El problema en el uso del callo es su inestabilidad genética que da como resultado variaciones fenotípicas en las células, impidiendo la formación declones, sin embargo ésta condición puede ser considerada una ventaja en mejoramiento vegetal o variabilidad genética (González, O. y Cols. 2002).
METODOLOGÍA:
Desinfección de Materiales:
Para la realización de este protocolo de obtención de callos es necesario que todos los materiales a utilizar pasen por un proceso de desinfección. Pinzas, bisturí, frasco con medio de cultivo, papel toalla, eindumentaria personal (mandil, mascarilla, gorro y zapatones) pasaron por un proceso de esterilización y desinfección como el autoclavado.
Se limpiaron las cámaras de flujo con alcohol al 90% para eliminar patógenos y se efectivizó este procedimiento con desinfección de luz UV del area de Siembra de Laboratorio de Cultivo de Tejidos de la ESPE.
Desinfección de la muestra:
Se lavaron las...
De la Cruz, K & Ortega, D
Escuela politécnica del ejército, Departamento de Ciencias de la vida
Carrera de Ing. en Biotecnología
Cultivo de tejidos
RESUMEN
Se realizó la obtención de callo a partir de un explante de zanahoria para lo cual se preparó el medio de cultivo MS enriquecido con: 30g de azúcar, 6g de agar, 0,5 mg/Lde BAP y 3mg/L de 2,4-D, esencial para cumplir con este propósito. Se ha establecido un protocolo de desinfección para el explante de zanahoria que consistió en sumergir la zanahoria en detergente al 1% durante 15 minutos; realizar 2 lavados con agua destilada y 1 con agua estéril. Por último se colocó a la zanahoria en cloro al 5% con 3 gotas de tween 20 durante 10 minutos. Finalmente serealizaron cortes transversales a la raíz de zanahoria sembradas en el medio. Se observaron los resultados al cabo de 5, 10 y 15 días, donde hubo gran variedad de resultados los cuales se puede observar en la tabla 1 y tabla 2.
INTRODUCCIÓN:
En 1902, Haberlandt propuso a teoría de que todas las células vegetales tienen la capacidad de formar plantas completas es decir, que tienentotipontecialidad. Sin embargo, esta hipótesis no pudo ser demostrada en aquel tiempo (Krikorian et al., 1969)
White (1939) informó acerca de la inducción de yemas adventicias in vitro a partir de callos de Nicotiana glauca x. N. langsdorfii y Nobecourt (1939) obtuvo raíces adventicias de un callo de zanahoria (Daucus carota). Estos experimentos respaldaron indirectamente la teoría de totipotencialidad de lascélulas vegetales (Roca, W. Mroginski, L. 1993).
Todos los tejidos vegetales tienen capacidad para formar callos in vitro; sin embargo, relativamente pocos explantes tienen la habilidad para producir callos embriogénicos. Comúnmente se han usado como explantes partes de plántulas como cotiledones, hipocótilos y embriones; adicionalmente, se han usado ápices caulinares, segmentos de tallos, hojas,raíces e inflorescencias inmaduras (Roca, W. Mroginski, L. 1993).
La regeneración de plantas directamente de los explantes, o a partir de callos, por medio de la organogénesis o de la embriogénesis somática se ha utilizado como una alternativa en los métodos de propagación (Litz, R. y Jarret, R. 2004). La totipotencialidad de las células vegetales cultivadas in vitro fue establecida porReinert (1958) y Steward et al. (1958), quienes describieron la inducción de embriones somáticos a partir de callos derivados del ápice radical de la zanahoria Daucus carota (Litz, R. y Jarret, R. 2004).
Se necesita la presencia de una auxina para la iniciación de un callo embriogénico. Usualmente se emplea el 2, 4–D, el cual aparentemente brinda el estímulo o inicia la inducción de la embriogénesissomática en el callo (Litz, R. y Jarret, R. 2004).
Un factor muy importante de los callos, desde el punto de vista funcional, es su crecimiento para formar raíces, tallos y embriones viables, es decir capaces de regenerar plantas completas. El problema en el uso del callo es su inestabilidad genética que da como resultado variaciones fenotípicas en las células, impidiendo la formación declones, sin embargo ésta condición puede ser considerada una ventaja en mejoramiento vegetal o variabilidad genética (González, O. y Cols. 2002).
METODOLOGÍA:
Desinfección de Materiales:
Para la realización de este protocolo de obtención de callos es necesario que todos los materiales a utilizar pasen por un proceso de desinfección. Pinzas, bisturí, frasco con medio de cultivo, papel toalla, eindumentaria personal (mandil, mascarilla, gorro y zapatones) pasaron por un proceso de esterilización y desinfección como el autoclavado.
Se limpiaron las cámaras de flujo con alcohol al 90% para eliminar patógenos y se efectivizó este procedimiento con desinfección de luz UV del area de Siembra de Laboratorio de Cultivo de Tejidos de la ESPE.
Desinfección de la muestra:
Se lavaron las...
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