Ciclos biogeoquimicos

PRÁCTICA NO. 5
OBTENCIÓN DE CULTIVOS PUROS

OBJETIVO: Al finalizar el trabajo práctico el estudiante estará en capacidad de:
• Ejecutar las técnicas básicas para el aislamiento de microorganismos en cultivo puro a partir de una muestra que contiene una población mixta.

INTRODUCCIÓN
Al diseminar sobre un medio de cultivo sólido una muestra de bacterias, diluida convenientemente, lascélulas individuales quedarán lo suficientemente separadas unas de otras y crecerán en forma de colonias aisladas, a partir de las cuales se puede obtener un cultivo puro.

METODOLOGÍA

A. Transferencias de medio líquido a medio sólido
1. Marcar el tubo de agar nutritivo estéril con su número equipo y fecha.

2. Agitar el cultivo para resupender la suspensión microbiana. Evitar mojar la tapadel tubo con el cultivo.

3. Esterilizar el asa a la llama.


4. Destapar el tubo que contiene el cultivo y flamear su punta. No dejar que la tapa se contamine colocándola sobre la mesa.

5. Insertar el asa estéril en el cultivo y tomar una asada para transferirla al otro tubo que contiene el medio de cultivo estéril.

6. Flamear nuevamente la boca del tubo que contiene el cultivo,tapar y colocar en la gradilla.

7. Destapar el tubo que contiene agar nutritivo estéril y flamear su punta. No dejar que la tapa se contamine colocándola sobre la mesa.
8. Para inocular el medio sólido estéril introducir el asa que contiene el cultivo en el tubo de agar nutritivo estéril hasta el fondo del tubo donde comienza el bisel y diseminar el inóculo sobre la superficie del mismomoviendo de lado a lado y hacia arriba hasta llegar a la punta del bisel.


9. Flamear nuevamente la punta del tubo y tapar.


10. Esterilizar nuevamente el asa

.
1. Colocar los tubos en su gradilla e incubarlos a 37°C por 24 horas.

B. Preparación de las placas de aislamiento
(Cada estudiante preparará dos placas)
1. Marcar la tapa de cada placa estéril con su número de equipo y lafecha.
2. Fundir en un baño de agua hirviendo los tubos con 20 mL de agar nutritivo, luego de que estén completamente fundidos, colocar en un baño de agua a 50°C.
3. Tomar el tubo de agar fundido y enfriado a 50°C, secarlo bien por fuera, flamear la boca del tubo y verter en la placa de Petri los 20 mL del agar.
4. Después de verter el medio, si es necesario, rotar la placa cuidadosamente paradistribuir el agar en forma homogénea, teniendo cuidado de no salpicar la tapa.
5. Dejar solidificar, lo cual ocurre en aproximadamente 10 minutos. Se puede dejar la tapa ligeramente abierta.

C. Aislamiento
1. Tomar una gota de la suspensión microbiana con el asa de platino estéril y fría, y colocarla sobre el agar en el sitio marcado con una X en la figura siguiente.

2. Diseminar lamuestra haciendo estrías con el asa sobre el agar en la dirección indicada en la figura siguiente.

3. Esterilizar el asa y enfriarla en el centro de la placa, hacer estrías en dirección perpendicular a las estrías anteriores como se indica en la figura siguiente.

4. Esterilizar el asa y enfriarla en el centro de la placa, hacer estrías en dirección perpendicular a las estrías anteriores comose indica en la figura siguiente.

5. Incubar una de las placas en posición invertida y en condiciones aeróbicas a 37ºC por 24 h.
6. Sobre la otra placa de cultivo trazar otro diseño de estrías.
7. Observar el crecimiento obtenido en las placas y las características de cultivo.

D. Transplante
1. Usando el asa de platino, transferir a un tubo con agar nutritivo inclinado, la colonia que leindicó el profesor, de la que ya anotó las características de acuerdo con lo indicado en la parte anterior.
2. Incubar a 37ºC por 24 horas.



RESULTADOS
Anotar lo observado y las características de cultivo

Dibujar lo observado.
Comparar los resultados con los de otros estudiantes que hayan utilizado microorganismos diferentes.

CONCLUSIONES.

BIBLIOGRAFIA.

PRÁCTICA 6....