Cinetica De Alfa Amilasa 1





Práctica 2: Cinética de la alfa amilasa salival
Introducción:
Las enzimas son catalizadores que aceleran la velocidad de las reacciones metabólicas
Para el proceso de digestión, las biomoleculas ingeridas en la dieta deben ser degradadas a sus componentes más sencillos para ser absorbidas a nivel del tubo digestivo y así llegar al lugar correspondiente a nivel celular.
La digestión de loscarbohidratos comienza en la boca, donde los alimentos se mezclan con la Amilasa salival que degrada los enlaces del almidón liberándose Maltosa, Glucosa y dextrinas de almidón que poseen todos los enlaces. La acción de las enzimas, por sus características físico-químicas, puede afectarse por las condiciones presentes en el lugar de acción de éstas. Entre los principales factores que puedenmodificar la acción enzimática tenemos:
. La temperatura.
. El pH.
. Inductores e inhibidores.
Los inhibidores tienen gran utilidad en bioquímica, ya que ayudan a determinar la especificidad de la enzima por el sustrato, la naturaleza de los grupos funcionales en el mantenimiento de la estructura activa de la enzima. Estos compuestos no son alterados químicamente por la enzima.
De acuerdo al tipo deinhibición que ejerzan éstas sustancias, se han clasificado en:
• Inhibidores Reversibles.
• Inhibidores Irreversibles
La α-amilasa denominada también sacarosa o ptialina es una enzima proteica e que se encuentra en la saliva humana y cataliza la degradación del almidón, es un polisacárido de reserva vegetal. El almidón está formado por dos tipos de moléculas: la amilosa y la amilopectina, ambospolisacáridos de glucosa. La amilosa se conforma por cadenas lineales de glucosas unidas por enlaces α- C1-C4, mientras que la amilopectina tiene, además de estos últimos enlaces, uniones C1 con C6, formando cadenas ramificadas. La α-amilasa rompe uniones C1-C4, tanto en la amilasa como en la amilopectina, dejando dextrinas lineales y ramificadas (oligosacáridos) como productos. Para medir la actividadenzimática de la α-amilasa, se utilizará un test colorimétrico que detecta el almidón. Para ello se contará con una solución de iodo/ioduro de potasio (I 2 /IK), ya que el almidón en presencia de esta solución adquiere una coloración azulada característica. Esto tiene una explicación física: el iodo se coloca en el interior de la hélice que forma la amilosa (en las regiones hidrofóbicas), formandoun complejo de color azul. Cuando la α-amilasa actúa, degrada la amilosa, se desintegra la hélice y por tanto en presencia de I 2 /IK ya no dará una coloración azul. Por lo tanto, en este TP mediremos la desaparición de sustrato (evidenciada por el test colorimétrico) para determinar la actividad de la enzima. Además, analizaremos cómo afectan las distintas condiciones en que actúa la enzima (pH,temperatura, concentración de NaCl), así como los efectos que pueden causar diferentes pretratamientos (proteinasa, calor). La dilución óptima nos indicará cuánto debemos diluir la saliva para que se logre el efecto acromático dentro del rango propuesto (2-8 minutos).
Objetivos:
Demostrar la cinetica d de la amilasa salival, determinando la presencia del almidón transformado y no transformado, yasi observar y analizar la presencia de carbohidratos reductores productos de la reacción observando el tiempo, temperatura, las rutas metabólicas que toma cada proceso bioquímico.
Marco teórico:
Descripción y clasificación.
Aunque existen por lo menos cincuenta componentes macromoléculas que se secretan en las glándulas salivales, la AASH es la macromolécula de mayor concentración en la saliva, ypor sus funciones enzimáticas representa también la enzima más importante en la saliva. Es una proteína multifuncional. El motivo común en ellas es el segmento de ocho hélices (β/α), que es el que contiene el sitio activo (o núcleo catalítico). En humanos, la α-amilasa está presente tanto en las secreciones pancreáticas como en la salival, sus secuencias promedio son altamente homólogas y con...