Estudio Cinético Del Enzima Alfa-Amilasa

ESTUDIO CINÉTICO DEL ENZIMA α-AMILASA: EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN, EL pH Y LA TEMPERATURA SOBRE LA VELOCIDAD DE UNA RECCIÓN ENZIMATICA


Universidad Icesi
Facultad de Ciencias Naturales
Laboratorio de Bioquímica
Santiago de Cali, Colombia
Octubre 9 de 2012


1. Resultados:

En este experimento se usó la prueba de lugol para determinar la presencia de almidón en la solución,generando un resultado positivo a la presencia de este y negativo a la ausencia del mismo. Sin embargo, para efectos prácticos se ha tomado como resultado positivo la actividad enzimática de la alfa amilasa, en otras palabras la ausencia de almidón, que significa que la proteína a llevado a cabo su función de hidrolizar al almidón, entonces, el resultado positivo para darlo en este informe es laactividad enzimática, por tanto será un resultado negativo a la prueba de almidón.

Método 1

Tabla 1. Estudio del efecto de la [E] sobre la velocidad de la reacción enzimática

Concentración del Enzima [E] (mL) | Tiempo en el que la prueba dio positiva | Inverso del Tiempo (1/min) |
0,1 | 10 | 0,1 |
0,2 | 10 | 0,1 |
0,3 | 10 | 0,1 |
0,4 | 10 | 0,1 |

Método 2

Tabla 2. Efecto del pHsobre la velocidad de la reacción enzimática

TIEMPO DE REACCIÓN | pH 4,0 | pH 7,0 |
Mins | Resultado | Resultado |
0 | Negativo | Negativo |
3 | Negativo | Positivo |
5 | Negativo | Positivo |
8 | Negativo | Positivo |
10 | Negativo | Positivo |
15 | Negativo | Positivo |
20 | Negativo | Positivo |
25 | Negativo | Positivo |
30 | Negativo | Positivo |

Tabla 3. Efecto delTiempo Sobre una reacción enzimática.

TIEMPO DE REACCIÓN | EFECTO DEL TIEMPO EN LA RX |
Mins | Resultado |
0 | Negativo |
3 | Negativo |
5 | Negativo |
8 | Negativo |
10 | Negativo |
15 | Positivo |

Método 3

Tabla 4. Estudio del efecto de la [S] sobre la velocidad de la reacción enzimática.

TIEMPO DE REACCION (Mins) | 0,5 mL Almidón | 1,0 mL Almidón | 1,5 mL Almidón |2,0 mL Almidón |
| Resultado | Resultado | Resultado | Resultado |
10 | Negativo | Negativo | Negativo | Negativo |
20 | Negativo | Negativo | Negativo | Negativo |
30 | Negativo | Negativo | Negativo | Negativo |
40 | Negativo | Negativo | Negativo | Negativo |
50 | Negativo | Negativo | Negativo | Negativo |

Método 4

Tabla 5. Efecto de la temperatura sobre la velocidad de unareacción enzimática

TIEMPO DE REACCIÓN (Mins) | 4°C | TEMPERATURA AMBIENTE | 50°C |
0 | Negativo | Negativo | Negativo |
2 | Negativo | Negativo | Positivo |
4 | Negativo | Negativo | Positivo |
6 | Negativo | Negativo | Positivo |
8 | Negativo | Negativo | Positivo |
10 | Negativo | Negativo | Positivo |

2. Análisis de Resultados

Para empezar la discusión, se debe aclararque las diluciones óptimas para salivas de diferentes personas son distintas puesto que las características y concentraciones de los compuestos varían de una persona a otra.

La alfa amilasa es una enzima proteica que se encuentra en la saliva humana y cataliza la degradación del almidón, que es un polisacárido de reserva vegeta. El almidón esta formado por dos tipos de moléculas: la Amilosa yla Amilopectina, ambos polisacáridos de glucosa. La amilosa se conforma por cadenas lineales de glucosas unidas por enlaces alfa-C1-C4, mientras que la amilopectina tiene uniones C1-C6 además de los tipos de enlaces antes mencionados. El alfa-amilasa rompe uniones C1-C4, tanto en la amilasa como en la amilopectina, dejando dextrinas lineales y ramificadas (oligosacáridos) como productos (1).Para llevar a cabo este experimento se uso la prueba de yodo, esta permite el reconocimiento del almidón en la solución debido a que el yodo es capaz de colocarse en el interior de la hélice que forma la amilosa, formando un complejo de color azul. Cuando la amilasa actúa y degrada el almidón estas hélices dejan de existir y la prueba de yodo será negativa.

En la primera parte de la práctica...