Claudia

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UNIVERSIDAD DEL VALLE DE MÉXICO
Campus Chapultepec

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

AISLAMIENTO, PURIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS

INTEGRANTES DEL EQUIPO:
García Meza Claudia Maribel
Camargo Cadena Tania Elizabeth
Ríos García José Roberto

FECHA DE ENTREGA: 26/marzo/2010

CALIFICACIÓN:__________________

●INDICE:○RESUMEN--------------------------------------------------------------------------------------------3

○INTRODUCCIÓN-----------------------------------------------------------------------------------4

○OBJETIVO--------------------------------------------------------------------------------------------9

○HIPÓTESIS-------------------------------------------------------------------------------------------9○MATERIAL------------------------------------------------------------------------------------------10

○EQUIPO---------------------------------------------------------------------------------------------10

○REACTIVOS----------------------------------------------------------------------------------------10

○METODOLOGÍA-----------------------------------------------------------------------------------11○RESULTADOS-------------------------------------------------------------------------------------13

○CONCLUSIÓN----------------------------------------------------------------------------------------

○BIBLIOGRAFIA-------------------------------------------------------------------------------------

●RESUMEN:

El primer requerimiento para aislar una enzima es encontrar un ensayo cuantitativo de actividad mediante el cualpueda valorársela convenientemente.

Para decidir si un paso de la purificación tiene sentido, es necesario medir la cantidad de enzima y la cantidad de impurezas antes y después de ese paso, y comparar los resultados de varios procedimientos posibles. Sólo en términos cuantitativos se puede saber si se ha producido algún progreso. Puesto que una gran parte del tiempo empleado en elaislamiento de una enzima está dedicado a determinar la actividad de las distintas fracciones, es deseable que ésta sea una operación rápida; es preferible sacrificar precisión por rapidez en las determinaciones.

La pureza de la enzima se ve reflejada en la actividad específica que es el cociente de actividad enzimática (expresada en unidades enzimáticas) y la cantidad total de proteínas.Extracción:
Las condiciones para extraer las enzimas y pasarlas a solución son a menudo críticas y requieren el estudio de muchas variables. Es necesario destruir las células, eventualmente las estructuras sub-celulares y disociar las enzimas de otras moléculas. A veces es necesario pasarlas a solución como complejo mucoprotéico o nucleoprotéico y disociarlo luego durante la purificación.

Aunque ladispersión de agregados moleculares puede frecuentemente lograrse mediante medios mecánicos, en muchos complejos enzimáticos están involucradas fuerzas específicas; de la naturaleza de las mismas depende el método a emplear.

Purificación:
Los métodos a elegir dependen de la fuente biológica y de la concentración de la enzima, y se basan en las distintas propiedades fisicoquímicas de lasproteínas.

El primer paso consiste en la separación de los distintos componentes intracelulares, generalmente por centrifugación. Las partículas que difieren en densidad o tamaño sedimentan a distintas velocidades por aplicación de una fuerza centrífuga (campo gravitacional, g). Una centrifugación diferencial permite la separación del homogenato en varias fracciones.

●INTRODUCCIÓN:

PROTEÍNAS

Lasproteínas son componentes esenciales de todos los sistemas vivos. Hay una gran variedad de proteínas y entre ellas se hallan las estructuras orgánicas más delicadas e intrincadas y de la máxima variación. Si fuera posible atribuir la propiedad de la vida a una variedad de compuestos químicos determinada, esta variedad serían las proteínas. Todo el metabolismo depende de las proteínas....
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