Coloracion De Gram

LABORATORIO DE BIOLOGIA
“COLORACION DE GRAM”

YULY MARCELA VALENCIA G
DAILY GOMEZ RAMIREZ
VIVIANA VALENCIA

Trabajo para la Asignatura
Biología General

Profesora
Carolina Machado Giraldo

POLITECNICO JAIME ISAZA CADAVID
TECNOLOGIA EN PRODUCCION AGROPECUARIA
RIONEGRO

INTRODUCCIÓN

La coloración de Gram debe su nombre al bacteriólogo Danés Christian Gram, que descubrió latécnica en1884. Es un procedimiento utilizado tanto para observar las características morfológicas de las bacterias como para realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana; consiste en dividir las bacterias en dos grupos considerándose como  Bacterias Gram positivas  a las que se visualizan de color azul-violeta y Bacterias Gram negativas a las que se visualizan de color rojo-rosadouna vez es llevado a cabo la técnica. Ésta está basada en la habilidad de los microorganismos para retener el colorante cristal violeta (agregado cuando se ha fijado la muestra) durante la decoloración con alcohol acetona, debido a la utilización de un mordiente (Lugol) que hace que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la célula bacteriana. Las Gram positivas retienen esecolor purpura mientras que las Gram negativas lo pierden después de la decoloración; una vez se hace este procedimiento se aplica Safranina que tiñe a las Gram negativas de color rosado.
La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloración, se debe a que la membrana externa de las Gram negativas es soluble al alcohol acetona, puesto que la capa que posee de peptidoglucano esdemasiado delgada como para retener el colorante cristal violeta y por lo tanto se pierde la coloración púrpura. Lo contrario pasa en las Gram positivas que al poseer una pared celular más resistente y con mayor porcentaje de peptidoglicano, no son susceptibles a la acción del alcohol acetona, sino que este actúa deshidratando los poros y cerrándolos, lo que impide que pueda escaparse el cristalvioleta.

OBJETIVO GENERAL
Una vez conocida la técnica de coloración de Gram, diferenciar entre dos muestras bacterianas (Burkholderia y Bacillos Subtilis) la Gram positiva y la Gram negativa.

MATERIALES
Portaobjetos y Cubreobjetos
Decolorante (Alcohol acetona)
Mordiente (Lugol)
Colorantes requeridos (Cristal violeta y Safranina)
Agua
Puente de coloración
Mechero
Asa de aro
MicroscopioMÉTODOS Y PROCEDIMENTO
Flameamos el asa de aro para tomar una gota de agua y ponerla sobre el portaobjetos, de nuevo la flameamos y tomamos la muestra (Burkholderia) para extenderla sobre el portaobjetos y fijamos el extendido encima de la llama del mechero.
1. En el puente de coloración pusimos la muestra y la cubrimos con el colorante cristal violeta durante 1min. Transcurrido, lavamos elportaobjetos para quitar el exceso de colorante, procurando que el chorro no cayera directamente sobre éste.
2. Luego cubrimos con Lugol la muestra igualmente por 1min y enjuagamos.
3. Después agregamos alcohol acetona durante 30seg y lavamos.
4. Por último cubrimos la muestra con Safranina (colorante básico) por 1min y enjuagamos; secamos la muestra a la llama del mechero.
Nota: Elprocedimiento anterior se hizo también para la segunda muestra bacteriana (Bacillus Subtilis) y ambas muestras fueron observadas en el microscopio a 10x, 40x y 100x con aceite de inmersión.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Imagienes…
CUESTIONARIO
1. ¿Cuál es la función del mordiente?
El lugol es un compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio), el cual está presente parasolubilizar el yodo, y actúa de mordiente, haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la célula bacteriana. El I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta.
2. ¿Por qué razón el azul de metileno no trabaja como colorante de contraste en la coloración de Gram?
Porque al teñirse microorganismo con éste...