Coloracion Gram

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PROCEDIMIENTOS:

COLORACION GRAM: CELULA PROCARIOTA (BACTERIA)
1. Realizar el frotis (Con la muestra del sarro dental).

2. Fijar o Secar la muestra

3. Añadir 1 ó 2 gotas de cristal violeta a la preparación, hasta que se cubra por completo. Dejar actuar el colorante durante 1 minuto.

4. Una vez transcurrido el tiempo, lavar la preparación con la pízeta sobre elrecipiente de plástico para tinciones.

5. Agregar 1 ó 2 gotas de solución lugol a la preparación, y dejar actuar 1 minuto. Una vez transcurrido el tiempo, lavar con agua de caño.

6. Con cuidado, añadir 3 gotas de alcohol-acetona, y esperar durante 1 minuto.

7. Añadir el colorante de contraste, safranina (1 ó 2 gotas) y dejar actuar durante 1 minuto y luego valar la muestra.

8.Secar la muestra.

9. Observar la muestra en el microscopio con menor aumento (10x).

10. Luego de observarla, agregar 1 gota de aceite de cedro, y observar la muestra con el objetivo de 100x.

RESULTADOS:

* Esta muestra (bacteria) que fue observada en el objetivo 100x es Gram Negativas, presentan una delgada capa de peptidoglicano, a la que se superpone una capa delipopolisacáridos –lipoproteína, denominada membrana externa.

* Las bacterias Gram positivas que presentan una gruesa capa de peptidoglicano como estructura fundamental por sobre la membrana citoplasmática

INTRODUCCION

COLORACION COMPUESTA
TINCION GRAM
La coloración de Gram ha constituido, desde los albores de la Bacteriología, un elemento fundamental para la taxonomía e identificaciones.
Luegodel descubrimiento casual realzado por el investigador danés, Christian Gram, pasaron muchos años durante los cuales se efectuaron las más variadas especulaciones sobre el mecanismo de esta coloración.
Resultaba indudable, sin embargo, su practicidad a los fines de la bacterianas, tanto en el aspecto físico como en su composición molecular que fueron logrados a partir de la década del sesenta,demostraron que la coloración de Gram distingue dos grupos de bacterias totalmente diferentes. Las bacterias Gram positivas que presentan una gruesa capa de peptidoglicano como estructura fundamental por sobre la membrana citoplasmática, y las Gram Negativas, que encima de esta, presentan una delgada capa de peptidoglicano, a la que se superpone una capa de lipopolisacáridos –lipoproteína, denominadamembrana externa, La presencia de esta membrana diferencia actualmente dos divisiones en sistemática bacteriana : Las que no lo poseen, Firmicutes (Gram + ) y las que sí, Gracilicutes (Gram - ). La diferencia entre ambos grupos es pues de enorme importancia taxonómica. El comportamiento como patógeno y en la sensibilidad antibacteriana difieren sustancialmente, de ahí que la realización rápidade una coloración de Gram, reviste enorme importancia en Bacteriología Clínica.
Esta coloración permite las clasificaciones de las bacterias en GRAM POSITIVAS Y GRAM NEGATIVAS según la composición de su “PARED CELULAR”.
Por esto el complejo de color formado con la pared de las bacterias Gram Positivas no puede ser removido con el agente decoloración que es el alcohol acetona.
La celularpermanece de color azul violeta, en cambio las bacterias de Gram negativas, al decolorarse con el alcohol acetona, se dejan colorear con la fascina o safranina, quedando de color rosado.

CODICIONES DE ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD

* Las soluciones deben almacenarse entre 15°C y 30°C y protegidos de la luz. Después de abierto el contenido almacenado es estable hasta la fecha de caducidadindicada en la etiqueta.

* Temperaturas inferiores a 15°C puede precipitar colorantes de las soluciones colorantes.

* Los frascos deben mantenerse siempre bien cerrados.

PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS

* La solución R1 Violeta Cristal y la solución R4 Fucsina básica o Safranina son irritantes en contacto con piel, ojos, y mucosas.

* La solución R3 Alcohol-Acetona y la solución...
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