Criptococosis Guia De Laboratorio

CRIPTOCOCOSIS GUIA DE LABORATORIO
IDENTIFICACION DE C. neoformans EN LCR

INTRODUCCION
La criptococosis es la micosis sistémica más frecuente entre los pacientes con sindrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA). Esta patología es causada por la infección por Cryptoccocus neoformans, el cual es un hongo saprófito de amplia distribución mundial que se encuentra normalmente en suelos y en lasheces de las palomas. Existen dos variedades de este hongo: C. neoformans v. neoformans y v. grubii, ambos con gran distribución a nivel mundial y son responsables de las infecciones en pacientes inmunocomprometidos. A su vez existe una tercera variedad conocida como C. neoformans v Gatti que tiene una menor incidencia pero es el causante de infecciones en pacientes inmunocompetentes.
En estelaboratorio se hará énfasis en la variedad C. neoformans v. neoformans que se observa en el 5-25% de los casos con manifestaciones clínicas de una meningitis o meningoencefalitis de evolución aguda o sub aguda. Estos pacientes presentan Teniendo en cuenta las características microscópicas y macroscópicas del liquido cefalorraquídeo, pueden ser similares a aquellas presentes en otras micosis, virosiso tuberculosis, por lo cual es necesario hacer un estudio micológico para confirmar el agente etiológico de la patología. Teniendo en cuenta la condición del paciente y la urgencia para encontrar un diagnostico certero para la implementación de un tratamiento, hemos escogido tres pruebas de laboratorio para confirmar un diagnostico, a partir de uno diferencial, tinta china cultivo, serología.OBJETIVOS
Mediante los diferentes estudios que se van a realizar se tendrán objetivos específicos para así llegar a la conclusiones de critptocosis.
 Tinta china: identificar la forma asexuada de la levadura encapsula polisacáridos del C. neoformans con un halo de 5 y 10 micras diámetro en líquido cefalorraquídeo.
 Cultivo del LCR, busca el crecimiento de colonias de C. neoformans en agarsabouraud’s que confirmarían la presencia de este patógeno en un amiente estéril.
 Serología: se implementara la prueba de antígenemia, anticuerpo especifico contra el antígeno polisacárido específico para C. neoformans (psc).
METODOLOGIA
La muestra se obtuvo por puncion lumbar, y luego es depositada en tubos de vidrio esteriles con tapa rosca. Esta parte del procedimiento se hizopreviamente en el hospital de donde se obtuvo la muestra del paciente.
TINCION CON TINTA CHINA
Materiales:
Laminas portaobjetos
Tinta china negra
Cultivo de LCR
Microscopio óptico 100X
Aceite de inmersión
* En una lámina limpia y seca portaobjetos, se le vierte una gota de tinta china.
* Se toma un poco del cultivo del LCR suspendido en solución salina después la muestra se mezcla con latinta china.
* A la lámina portaobjetos se cubre con una lamilla transparente evitando la contaminación de la muestra. Este proceso debe evitar la formación burbujas para esto se debe se presiona gentilmente la laminilla.
* Finalmente, te observa el resultado a partir de objetivos secos con aceite de inmersión.
* Se busca ver la capsula de los microorganismos demostrado con un haloblanco alrededor de ellos.

CULTIVO
1. Centrifugar la muestra a 1500 g o 3500 rpm por 15 minutos.
2. El sedimento debe ser sembrado sobre ASD o agar infusión cerebro o agar semilla de girasol (agar niger seed) o agar sabouraud’s . Emplear en cuatro o seis tubos conteniendo el medio de cultivo por muestra. Incubar a temperatura ambiente y 37°C por cuatro semanas.
3. Por ultimo, se hace lalectura e interpretación de los cultivos. Durante la primera semana de incubación realizar las lecturas a diario de los medios de cultivo, luego puede realizarse dos veces por semana hasta completar el tiempo de incubación establecida. Una vez realizado el aislamiento primario sembrar en medios de cultivo selectivos para su tipificación.
PRUEBAS SEROLOGICAS
TEST DE AGLUTINACION POR LATEX...