cromatografia en columna

La cromatografía es un método físico de separación para la caracterización de mezclas complejas, la cual tiene aplicación en todas las ramas de la ciencia. Es un conjunto de técnicas basadas en el principio de retención selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes. Diferencias sutiles en elcoeficiente de partición de los compuestos da como resultado una retención diferencial sobre la fase estacionaria y por tanto una separación efectiva en función de los tiempos de retención de cada componente de la mezcla.
1. De acuerdo con la forma del lecho cromatográfico:
1.1 Cromatografía plana
Se realiza sobre papel u otro material sólido. Suele llamarse “en capa fina” o “en capa delgada”porque la fase estacionaria recubre un soporte plano y rígido.
Cromatografía ascendente en capa fina
Disposiciones experimentales para realizar una cromatografía en papel descendente (izqda.) y ascendente (dcha.).



Cromatografía ascendente en capa fina: colocación de una muestra (con 3 componentes), desarrollo de la cromatografía y revelado del cromatograma.
Rf es el factor de retardo oretraso, que mide la movilidad relativa de cada componente con respecto al máximo posible, la distancia recorrida por el frente de fase móvil.
Componente 1: Rf = a / D
Componente 2: Rf = b / D
Componente 3: Rf = c / D

1: aplicación de la muestra
2: se sumerge el extremo inferior en la fase móvil
3 a 5: la fase móvil asciende por capilaridad y se va produciendo la separación de loscomponentes
6: se marca el frente de avance del disolvente y se deja secar la placa
7: revelado de los componentes ya separados y medida de su avance
1.2 Cromatografía en columna
F.M. líquida, F.E. sólida: columnas de varios mm de diámetro y varios cm de longitud.
F.M. gas, F.E. sólida: columnas de unos 5 mm de diámetro y 1-20 m de longitud.
F.M. gas, F.E. líquida: columnas “capilares”, conmenor diámetro y 30-100 m (incluso más) de longitud.
Puede verse una animación del avance de las moléculas por la columna.

Funcionamiento de una columna, mostrando la carga de la muestra y diversos momentos a lo largo de la elución:
1. Muestra depositada sobre el lecho cromatográfico
2. La muestra penetra en el lecho
3. Se añade fase móvil
4. Comienza la separación de los componentes de lamuestra
1. Eluye el primer componente
1. Eluye el segundo componente
2. De acuerdo con el estado físico de las fases


fase móvil


líquida
gaseosa


“cromatografía
líquida”
“cromatografía
de gases”
fase
estacionaria
sólida
Cromatografía
líquido-sólido
Cromatografía
gas-sólido

líquida
Cromatografía
líquido-líquido
Cromatografía
gas-líquido
2.1 Cromatografía degases
Con fase móvil gaseosa.
Cromatografía gas-líquido
Cromatografía gas-sólido
2.2 Cromatografía líquida
Con fase móvil líquida.
Cromatografía líquido-líquido
Cromatografía líquido-sólido
2.2.1 HPLC
Cromatografía líquida de alta presión o de alta eficacia (cuando se emplean particulas de fase estacionaria muy pequeñas y una presión de entrada relativamente alta).
[HPLC, de High PressureLiquid Chromatography / High Performance Liquid Chromatography]
3. De acuerdo con el mecanismo de separación
Nota: Ésta es una clasificación conceptual; en la práctica, el mecanismo que rige la separación puede ser mixto; p.ej., adsorción+reparto.
3.1 Cromatografía de adsorción
(atención: es adsorción, no absorción)
Diferente afinidad de adsorción de los componentes de la muestra sobre lasuperficie de un sólido activo. La adsorción es la capacidad de las superficies para fijar moléculas.
La F.E. es siempre sólida. Ejemplos: alúmina, gel de sílice, carbón activo, fosfato cálcico, hidroxiapatito...
3.2 Cromatografía de reparto
Diferente solubilidad de los componentes de la muestra en la fase estacionaria (caso de la cromatografía de gases), o diferentes solubilidades de los...