cromatografia



LABORATORIO Nº9

Cromatografía en placa fina
(CPF)Introducción
En este practico se llevara a cabo la cromatografía de la clorofila de la espinaca por medio de unplaca fina.
La cromatografía es una técnica que permite la separación de los componentes de una mezcla. La técnica de cromatografía en placa fina (CPF) separar los componentes debido a dos fases que se presentan. Para realizar esta técnica de forma óptima se debe dejar la placa apoyado en un recipiente o cámara que contiene la fase móvil.
La fase móvil, es un mezcla dehexano-etanol en la razón 4:2, fluye por medio de la placa de modo ascendente separando los componentes por capilaridad que posteriormente se presentaran en diversos colores.
La otra fase es llamada fase estacionaria la cual es la sustancia que esta fija durante la cromatografía, en este caso la placa fina. Posteriormente de este proceso que tiene una duración menor a 20 minutosse saca la placa de la cámara y se mide el factor de retención, el cual es la relación entre la distancia recorrida por la muestra sobre la distancia recorrida por el solvente (fase móvil).
Una de las ventajas de esta forma de cromatografía es que el tiempo que se necesita para conseguir las separaciones es mucho menor y la separación es generalmente mejor. El método es simple y losresultados son fácilmente reproducibles, lo que hace que sea un método adecuado para fines analíticos.
Para finalizar se mostraran los resultados de este practico y mostrando los objetivos planteados y logrados.




Objetivos
Adquirir los conocimientos necesarios sobre técnicas de cromatografía en placa fina.
Distinguir los diferentes pigmentos provenientes del vegetalutilizado.
Distinguir las etapas del proceso de cromatografía.


Procedimiento experimental

Materiales:
Espinaca
Mortero
Mezcla de hexano/etanol
Embudo simple
Algodón
Embudo de decantación
Agua destilada
Matraz de 50 mL
Sulfato de sodio (Na2SO4)
Cámara cromatográfica
Mezcla hexano/acetona
Capilar
Placa de aluminio











Experimento
Procedimiento.-
1. Se pesa 1 gde hojas de espinacas y se coloca en un mortero, para luego adicionar 10 mL de mezcla hexano/etanol*, en proporción 4:2, y moler las hojas hasta lograr un extracto verde oscuro.
2. Filtrar el extracto en un embudo simple con una mota de algodón para evitar el paso de material sólido, y el filtrado se transfiere a un embudo de decantación y se agrega un volumen de agua destilada similar al volumendel filtrado nuevamente para evitar emulsión.
3. Extraer la fase acuosa (etanol más elementos solubles).
4. La fase orgánica trasvasijarla a un matraz de 50 mL y agregar una punta de espátula de Na2SO4 y dejarlo por 5 minutos aproximadamente.
5. Preparar la cámara cromatográfica, con la mezcla de hexano/acetona, en proporción 7:3, dejar saturar la cámara con el solvente por 15 minutos. Luegosacar una alícuota de la muestra y sembrarla con un capilar sobre la línea de siembra hecha sobre la placa a 1 cm del borde inferior.
6. Cuando el solvente este a 1 cm del final, retirar la placa y esperar que se evapore el solvente. Observar y marcar los componentes del cromatograma.

* El volumen real utilizado de hexano/etanol fue de 19 mL.











Resultados.-

Cálculo...