Cromatografia

TÉCNICAS CROMATOGRÁFICAS

INTRODUCCIÓN

La cromatografía es una técnica de separación, aunque también puede emplearse con fines cuantitativos, en la cual un fluido (líquido o gas) circula en íntimo contacto con una fase estacionaria. Si se introducen en un punto del sistema una mezcla de sustancias solubles en la fase móvil, éstas avanzan por el sistema con diferentes velocidades dependiendode su afinidad por ambas fases, entre las cuales se distribuye. Así, al cabo de cierto tiempo los distintos componentes de la muestras estarán separados.

La naturaleza de la fase estacionaria es la que impone el mecanismo de distribución del soluto entre las dos fases. Si es un líquido inmiscible con la fase móvil se llama cromatografía de reparto; si es un sólido adsorbente, cromatografía deadsorción; si es un sólido con iones que retiene iones de signo contrario, cromatografía de intercambio iónico; si el sólido posee poros de tamaño controlado que permiten la entrada de moléculas de hasta un cierto tamaño y deja fuera otras mayores, cromatografía de exclusión.
1. La clasificación de los tipos de cromatografía según el tipo de soporte es:
Líquida
Métodos planos
De papel
Capafina
En columna
Abierta ( presión atmosférica)
HPLC
De gases
Columna empaquetada
Capilar
2. La clasificación de los tipos de cromatografía según el mecanismo de separación es:
Líquida
• Líquido sólido (adsorción)
• Intercambio iónico: catiónico o aniónico
• Líquido-líquido (de partición)
• Exclusión por tamaño molecular
De gases
Gas-sólido (adsorción)
Gas-líquido (partición)PRINCIPIOS FUNDAMENTALES
La técnica cromatográfica separa mezclas de solutos basándose en la diferente velocidad de desplazamiento de los mismos, que se establece al ser arrastrados por una fase móvil (líquida o gaseosa) a través de un lecho cromatográfico que contiene una fase estacionaria, que puede ser sólida o líquida.
Es por tanto un sistema de separación dinámica entre una fase móvil dondese encuentran los solutos a separar y una fase estacionaria que es el lecho a través del cual fluye la móvil. Los componentes de la mezcla de solutos se separan en función de su distribución entre ambas fases en virtud de un proceso de equilibrio de separación, principalmente físicoquímico, según la afinidad que tenga por una u otra fase.
El equilibrio de distribución se refiere a diferenciasde solubilidad y adsorción de un componente entre dos fases inmiscibles. Las bases teóricas y la capacidad de predicción de los equilibrios de separación están fundamentadas en los principios físico-químicos de la termodinámica y la interacción molecular.
Una vez que todos los componentes de la mezcla han atravesado la fase estacionaria, salen separados unos de otros, lo que se utiliza con finesde identificación, cuantificación o investigación posterior.
La fase estacionaria consiste en partículas, generalmente sólidas, pequeñas y con una superficie microporosa, de forma que presenta un amplio desarrollo superficial. Puede estar empaquetada en forma de columna o extendida en forma de capa. En ocasiones es necesario un tratamiento químico de la fase estacionaria para conseguir unaspartículas de tamaño y poro adecuados.
La fase móvil puede ser un líquido o un gas, y su función es transportar a los componentes de la mezcla a través del sistema cromatográfico.
Las fases de ejecución de una técnica cromatográfica, sea del tipo que sea, tienen una secuencia común.
El proceso empieza con la introducción de la muestra, vehiculada en un solvente adecuado (fase móvil), que hacemospasar por un lecho (fase estacionaria) sobre el que fluye la mezcla de solutos, que queremos separar, en una muestra. El desarrollo cromatográfico es el paso a través de la fase estacionaria después del cual salen separadas las fracciones. Posteriormente las distintas fracciones se visualizan o cuantifican por distintos métodos. En clínica, la mayoría de las técnicas utilizan la elución de las...