Cromatografia

Cr omatogr afía en capa fina. 
Objetivo 
Familiarizar  al  alumno  con  los  fundamentos  de  la  cromatografía,  y  con  las  manipulaciones que se realizan en la cromatografía en capa fina. 

Introducción  
Las técnicas cromatográficas se utilizan para  la  separación de  los  componentes  de  una  mezcla  homogénea,  tanto  con  fines  analíticos  como  preparativos.  Una  característica común  de  las  técnicas  cromatográficas  es  la  presencia  de  dos  fases  en  contacto, las denominadas fase móvil y fase estacionaria. Esta última está formada por  un sólido  finamente dividido, ó por un  líquido viscoso retenido sobre  la  superficie del  sólido, mientras que la fase móvil está constituida por un líquido, ó un gas, que fluye a  través de  los poros de  la fase estacionaria. Las dos fases deben ser  inertes en relación  con  las  sustancias  que  se  van  a  separar,  y  no  deben  actuar  como  catalizadores  de  reacciones en las que intervengan dichas sustancias. Con frecuencia, la fase estacionaria  se dispone en forma de columna cilíndrica, y la fase móvil la atraviesa impulsada por la  diferencia  de  presión  entre  los  extremos  de  la  columna,  en  este caso  hablamos  de  cromatografía  en  columna.  En  esta  práctica  utilizaremos  una  disposición  de  la  fase  estacionaria  en  forma  de  una  fina  película  depositada  sobre  un  sustrato  (aluminio,  plástico  o  vidrio)  inerte  y plano,  a  esta  técnica  se  le  denomina  cromatografía  en  capa fina. El flujo de la fase móvil se debe en este caso a las fuerzas capilares, que impulsan  el movimiento del líquido a través de la red de microcanales que rodea a las partículas  de la fase estacionaria, de forma análoga a como fluye la savia en un árbol. 

Columna                  Capa fina

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Los componentes de la mezcla, al igual que sucede en el proceso de extracción  líquido­líquido,  tienen  una  afinidad  distinta  por  cada  una  de  las  dos  fases.  En  consecuencia,  tenderán a repartirse  entre  las  dos  fases  en  una  proporción  determinada  por el valor de la constante del equilibrio de intercambio (K) de cada componente. Una  vez que se han repartido los componentes de la mezcla entre las dos fases, la separación  se realiza gracias a la influencia de dos efectos contrapuestos: el efecto de retención que  ejerce  la  fase  estacionaria  sobre  los  componentes que  se  encuentran  en  contacto  con  ella,  y  el  efecto  de  desplazamiento  que  ejerce  la  fase  móvil  sobre  esos  mismos  componentes  cuando  se  encuentran  disueltos  en  la  fase  móvil.  Cuanto  mayor  sea  la  afinidad de un componente por la fase estacionaria, más tiempo pasará en contacto con  esta fase, sin moverse, y por tanto tardará más en recorrer una distancia dada a lo largo de la fase estacionaria. Al desplazamiento de los componentes de una mezcla a lo largo  de la fase estacionaria, al ser arrastrados por la fase móvil, se le denomina elución. 

Componentes a separ ar   Par tículas del sopor te 

K1 

K2

Elución 

Tiempo 
En  la  cromatografía  en  capa  fina,  el  adsorbente  se  encuentra  depositado  sobre  una  placa  inerte,  formando  una película  de  espesor  uniforme  (0,1­0,2  mm  para  las  aplicaciones  analíticas,  y  1­2  mm  para  las  aplicaciones  preparativas).  Esta  técnica  cromatográfica  hace  uso  de  las  diferencias  entre  las  constantes  del  equilibrio  de  adsorción/desorción de los componentes de la mezcla, y se caracteriza por emplear una  fase  estacionaria  sólida  (adsorbente)  de  carácter  polar,  y  una fase  móvil  líquida  (eluyente)  de  polaridad  variable.  El  adsorbente  es  un  sólido  poroso  finamente  granulado,  que  contiene  centros  polares  aptos  para  adsorber  preferentemente  las 

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moléculas polares presentes en la mezcla. El adsorbente más utilizado es el gel de sílice;  las  interacciones  en  este  caso  se  establecen  entre  los  grupos ...