Cromatografía de capa fina para la separación de aminoácidos y detección mediante la reacción de Ninhidrina

Uso de la cromatografía en capa fina para la separación de aminoácidos y detección mediante la reacción de Ninhidrina
M. Morales, A. Meléndez y L. Guerra Alvarez


RESUMEN

Introducción:
Utilización de la cromatografía en capa fina, mediante una placa de sílica gel, para la separación de aminoácidos como ácido, aspártico, arginina, y alanina, siendo determinados por la reacción de Ninhidrina.Objetivo:
Conocer y utilizar la reacción de color, Ninhidrina, para la determinación de aminoácidos mediante una cromatografía de capa fina e identificarlos con el Rf (Factor de retardo).

Diseño:
Se saturó un beaker con la fase móvil (alcohol etílico e hidróxido de amonio), y se tapó con un vidrio de reloj. En una placa de sílica gel, se colocaron 3 puntos con aminoácidos (ácido aspártico,arginina y un compuesto desconocido). Antes de que el solvente saliera de la placa se sacó y puso a secar en la campana. Luego se roció con solución de Ninhidrina en acetona, y se secó con una secadora de pelo. Al secarlo, se tomaron medidas del solvente y puntos donde llegaron los aminoácidos para así calcular el Rf de cada uno de ellos.

Resultados:
En el Cuadro 1 se puede observar que el aminoácidocon menos factor de retardo fue la arginina, mientras que la alanina y es ácido aspártico tuvieron un factor de retardo muy alto. Si el factor de retardo de una sustancia es menor, la afinidad de esta con el solvente va a ser muy baja.

La alanina obtuvo un mejor factor de retardo ya que este es muy afín al solvente (alcohol etílico e hidróxido de amonio) y posee una baja polaridad.

Mientrasmás se mantenga la muestra durante la fase móvil, más afín es a ella.

Conclusiones:
La arginina obtuvo un menor factor de retardo, siendo de 0.29, indicando poca afinidad con la fase móvil.
El compuesto más alejado de la línea final del solvente fue la arginina, debiéndose a su alta polaridad.
El compuesto más afín a la fase móvil fue la alanina, ya que obtuvo el Rf más alto (0.79) y cercano a 1.
Elácido espártico también tiene afinidad con el solvente debido a que tuvo un Rf de 0.72.


INTRODUCCIÓN

Las proteínas son moléculas formadas por aminoácidos que están unidos por un tipo de enlaces conocidos como enlaces peptídicos. Los aminoácidos son compuestos orgánicos que se combinan para formar proteínas. Estos se pueden clasificar en esenciales y no esenciales. Los aminoácidos esenciales nolos puede producir el cuerpo. En consecuencia, deben provenir de los alimentos. No esencial significa que nuestros cuerpos producen un aminoácido, aun cuando no lo obtengamos de los alimentos que consumimos. La cromatografía de capa fina es un procedimiento que se utiliza para separar moléculas relativamente pequeñas. Al igual que otras cromatografías, consiste de una fase estacionaria y una fasemóvil y el principio es el mismo: la sustancia de interés se adherirá a la fase estacionaria o se moverá con la fase móvil, viajando una distancia que es inversamente proporcional a la afinidad por la fase estacionaria. (Nelson 2008).

La Ninhidrina (hidrato de tricetohidrindeno) reacciona con aminoácidos que tengan el grupo amino libre, dando lugar a la formación de amoniaco y anhídridocarbónico, con reducción del reactivo (Ninhidrina) a hidrindantina. La hidrindantina reacciona a su vez con el amoniaco y otra molécula de ninhidrina para dar un compuesto de adición doble que presenta una coloración azul-púrpura. La técnica es muy sensible, por lo que es ideal para detectar concentraciones bajas de aminoácidos, utilizándose para revelar su presencia en cromatogramas y fraccionesprocedentes de otras técnicas de separación. La presencia de aldehídos resultantes de la degradación de la ninhidrina por reacción con los aminoácidos modifica, bajo ciertas condiciones, el color formado, lo que sirve para identificar el tipo de aminoácido (Smith y Feinberg 1965).


MATERIALES Y MÉTODOS

Cromatografía de capa fina
Cortar la placa de sílica gel y hacer una línea con...