Cromatografía y aminoácidos

PRINCIPIOS TEÓRICOS
CROMATOGRAFÍA
Según Keulemans: la cromatografía es un método de separación en el que los componentes a desglosar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales constituye un lecho estacionario de amplio desarrollo superficial y la otra es un fluido que pasa a través o a lo largo del lecho estacionario.
Se utiliza el término general de lecho para definir las distintasformas en que puede encontrarse la fase estacionaria. Las separaciones cromatográficas se consiguen mediante la distribución de los componentes de una mezcla entre la fase fija y la fase móvil. La separación entre dos sustancias empieza cuando una es retenida más fuertemente por la fase estacionaria que la otra, que tiende a desplazarse más rápidamente en la fase móvil. Las retenciones mencionadaspueden tener su origen en dos fenómenos de interacción que se dan entre las dos fases y que pueden ser :
1.-La adsorción, que es la retención de una especie química por parte de los puntos activos de la superficie de un sólido quedando delimitado el fenómeno a la superficie que separa las fases o superficie interfacial.
2.- La absorción, que es la retención de una especie química por parte de unamasa, y debido a la tendencia que esta tiene a formar mezcla con la primera,absorción pura, o a reaccionar químicamente con la misma, absorción con reacción química, considerando ambas como un fenómeno másico y no superficial.
Hay diferentes tipos de cromatografías:
CROMATOGRAFÍA EN PAPEL
CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA
CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO
CROMATOGRAFÍA DE GEL-FIJACIÓNCROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD
CROMATOGRAFÍA DE GASES
CROMATOGRAFÍA EN PAPEL
Este tipo de cromatografía se utiliza para compuestos muy polares o polifuncionales. El uso más común es para azúcares, aminoácidos y pigmentos naturales.
En esta cromatografía se utiliza el fenómeno de partición en donde la fase estacionaria se halla sobre un soporte activo (el papel) que en realidad forma parte de la faseestacionaria que es el agua. Las fases móvil y estacionaria estarán en contacto en una gran interfase, lo que permite una rápida obtención de una distribución de equilibrio del soluto entre ellas. Si la muestra problema está formada por más de un soluto, éstos se separan por sus diferentes coeficientes de partición.
La realización de la cromatografía en papel implica la siembra de la muestra problemaen un trozo de papel de buena calidad, en general Whatman N°1 para cromatografía analítica, que luego se introducirá en una cuba de desarrollo de modo que el solvente (fase móvil) ascienda por capilaridad (técnica ascendente) o descienda por capilaridad y gravedad (técnica descendente). La fase estacionaria es un complejo celulosa - agua que tiene un poder diferente que el del agua pura.ETAPAS DE LA CROMATOGRAFÍA EN PAPEL
Siembra:
Se aplican muestras en solución a no menos de 1,5 cm del borde inferior de una tira rectangular de papel, y a no menos de 1,5 cm de los bordes laterales, manteniendo a su vez, entre mancha y mancha una distancia no menor de 1 cm. Se hace un toque, se evapora el solvente, se hace otro toque, tratando de concentrar la muestra sin superar un diámetrode la mancha de 3 mm. La siembra es puntual para fines analíticos, y en banda para fines preparativos.
Desarrollo:
Ascendente: el solvente se coloca en el fondo de la cuba y el papel se suspende colocado en la parte superior de la cuba.
Descendente: el solvente se coloca en un depósito inerte ubicado en la parte superior de la cuba cromatográfica. En el fondo de la cuba se coloca también unpoco de solvente para asegurar la saturación con el vapor. La parte superior del papel se sumerge en el disolvente y se tapa herméticamente la cuba (al igual que en la técnica ascendente). La siembra quedará en la parte superior del papel.
Bidimensional: se corre el papel en una dirección y luego del desarrollo y secado se gira 90° y se corre con otro solvente.
Revelado:
Si los compuestos...