Cuantificación de proteínas

Cuantificación de proteínas.

La determinación del contenido proteico de una muestra requiere la comparación del valor de absorbancia de la muestra con los obtenidos a partir de cantidadesconocidas de proteínas, para esto se realizó una curva estándar de la albúmina de suero bovino. Utilizamos el método de Bradford para la cuantificación de la caseína obtenida en la práctica 2.Introducción:
La cuantificación del contenido total de proteínas de una muestra es una metodología requerida en muchas aplicaciones tanto en ciencia básica como en análisis clínicos, entre muchas otras. Así,para estudiar la estructura de una proteína, la actividad de una enzima o el contenido proteínico de un alimento, es necesario conocer cuantitativamente la concentración de las proteínas en la muestra.Se han desarrollado diferentes técnicas que se basan en la formación de complejos coloridos entre las proteínas y reactivos específicos.
La cuantificación de proteínas mediante el método de Bradfordemplea un colorante hidrofóbico cuyas disoluciones acuosas en presencia de ácido fosfórico tienen un color pardo y que, al encontrarse en el entorno hidrofóbico del interior de una proteína, originaun color azul intenso que se puede medir fácilmente. Este método depende de la interacción relativamente inespecífica entre un colorante hidrofóbico y las proteínas, por lo que es relativamentesensible a la presencia de contaminantes tales como restos de detergente y líquidos orgánicos como el metanol. Su principal ventaja es que resulta más rápido y fácil de emplear que otros métodosalternativos, y más sensible que la medida de absorbancia a 280nm. Para determinar la concentración de proteína total presente en una muestra se requiere la preparación de una curva de calibrado empleando unaproteína patrón, que generalmente suele ser la albúmina de suero bovino.

Objetivos:
Conocer la técnica de Bradford para la determinación de la cantidad de proteína en una muestra biológica....